| 摘 要： | 目的评价重组杜氏利什曼原虫延伸因子1-α(recombinant Elongation factor 1-α,rEF 1-α)和β-微管蛋白(recombinantβ-tubulin,rβ-tubulin)的免疫刺激效应及诱导免疫应答类型。方法从杜氏利什曼原虫四川人分离株基因组中扩增EF 1-α、β-tubulin基因,以分子克隆技术构建pQE30-EF 1-α、pQE30-β-tubulin重组质粒。将酶切与测序鉴定正确的重组子转化E.coil M15菌株,用IPTG诱导表达rEF 1-α和rβ-tubulin,表达产物经镍柱亲和层析纯化后辅以弗氏佐剂制成疫苗免疫BALB/c小鼠,采用Western blot法检测小鼠抗血清的特异性,ELISA法检测抗血清效价。分离各组小鼠脾细胞,体外培养60h后再次接受相同抗原刺激,检测IL-4、IL-12、IFN-γ水平。结果重组菌表达的rEF 1-α、rβ-tubulin均以包涵体形式存在,两表达产物免疫小鼠后获得的抗血清均具有特异性,效价分别为1∶800和1∶1 600。rEF 1-α、rβ-tubulin免疫小鼠脾细胞培养上清IL-4含量均高于对照组(P0.05),IL-12、IFN-γ与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论成功表达了杜氏利什曼原虫rEF 1-α、rβ-tubulin,两种重组蛋白均可诱导Th2型免疫应答。
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