血管平滑肌细胞分泌氧化应激诱导因子的纯化与确定

活性氧通过促进血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖已被认为是动脉粥样硬化和高血压的病因之一。我们以前的实验显示 ,超氧阴离子生成剂LY835 83激活VSMC细胞外信号调节激酶 (ERK1 2 ) ,并呈现出两个效应峰值特征。早期效应出现在LY835 83作用后 10min ,晚期效应出现在LY835 83作用后 2h。LY835 83通过激活ERK1 2诱导VSMC增殖。我们推测 ,LY835 83作用的第一相是其进入细胞后产生超氧阴离子所致 ,因为超氧阴离子产生抑制剂Tiron只取消LY835 83的第一相作用 ;而第二相作用可能是由于LY835 83刺激VSMC释放ERK1 2激活因子所为。我们将这种因子命名为氧化应激诱导因子 (secretedoxida tivestress -inducedfactors,SOXF)。为了证实此一假设 ,我们采用SPSepharose、HeparinSepharose、PhenylSepharose、GelFiltration等一系列亲合层析和凝胶过滤技术 ,以分离获得的成分是否能激活ERK1 2为监测指标 ,从受LY835 83刺激 2h的VSMC条件培养基中分离出SOXF蛋白。然后通过毛细管色谱 (CCG)技术和ElectrosprayIonizationTandemMassSpectrometry技术分析发现热休克蛋白 90 -a (HSP90 -a)和CyclophilinB是主要的SOXF。免疫印迹分析发现 ,VSMC受LY835 83刺激后特异地分泌HSP90-a,而不是HSP90 -b。随后的实验发现 ,条件培养基中的H