HPLC测定炎症性肠病患者红细胞中6-硫鸟嘌呤核苷酸及6-甲巯基嘌呤的浓度

摘要：目的:建立HPLC法同时测定炎症性肠病（IBD）患者红细胞中硫唑嘌呤代谢物6-硫鸟嘌呤核苷酸（6-TGNs）及6-甲巯基嘌呤（6-MMP）浓度,为硫唑嘌呤（AZA）个体化治疗提供依据。方法:红细胞经高氯酸沉淀,6-TGNs在酸性条件下加热水解生成6-硫鸟嘌呤（6-TG）,6-MMP水解生成4-氨基-5-（甲硫基）羰基咪唑（AMTCI）,以5-溴尿嘧啶（5-BU）为内标,采用HPLC法测定其含量。色谱柱:Kromasil 100-5-C18（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相:乙腈-20 mmol·L1磷酸二氢钾溶液（6∶94）,流速:0.8 ml·min-1,柱温:30℃;6-TG、6-MMP及5-BU检测波长分别为340,303,280 nm。10例IBD患者,口服AZA 50～100 mg·d-11个月以上,检测其6-TGNs及6-MMP浓度,焦磷酸测序检测TPMT基因型。结果:6-TG在8～800pmol﹒（8×108）-1RBC浓度范围内线性关系良好（r=0.994 0）;低、中、高3个浓度的绝对回收率为63.24%～69.09%（n=5）。AMTCI在250～16 000 pmol·（8×108）-1RBC浓度范围内线性关系良好（r=0.997 8）;低、中、高3个浓度的绝对回收率为85.17%～92.28%（n=5）。10例患者TPMT均为野生型。1例患者6-TGNs浓度偏高,白细胞减少;2例患者6-MMP浓度较高,碱性磷酸酶轻度升高。结论:本方法专属性、精密度及稳定性较好,灵敏度高,适用于同时测定炎症性肠病患者红细胞中6-TGNs及6-MMP的浓度。