| 小鼠B7-H4基因克隆及真核表达载体的构建 |
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| 作者姓名： | 徐军发 袁春雷 杨衡 赵坤 胡国艳 龚非力 |
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| 作者单位： | 1. 广东医学院临床免疫学教研室,广东,湛江,524023;华中科技大学同济医学院免疫学系,湖北,武汉,430030
2. 华中科技大学同济医学院免疫学系,湖北,武汉,430030
3. 广东医学院临床免疫学教研室,广东,湛江,524023 |
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| 基金项目： | 广东省科学事业费计划;高等学校博士学科点专项科研项目;广东医学院博士基金 |
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| 摘 要： | 目的:克隆小鼠B7-H4(mB7-H4)基因cDNA全长,构建表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-GFP和表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-Fc。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB7-H4cDNA,将其全长cDNA去掉中止密码克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,并转染293T细胞使其表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白;将其胞外功能区cDNA克隆入pcDNA3·1-hFc真核表达载体中,并转染COS-7细胞使其表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白。结果:序列测定证实克隆的mB7-H4全长cDNA阅读框正确完整,酶切和序列测定证实mB7-H4分别正确插入pEGFP-N1和pcDNA3·1-hFc载体中,两种表达载体分别转染293T细胞和COS-7细胞后可分别表达跨膜型mB7-H4-GFP和可溶性mB7-H4-Fc。结论:成功地克隆mB7-H4基因并构建了两个真核表达载体,它们可分别表达跨膜型和可溶性融合蛋白。
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| 关 键 词： | 真核表达 基因克隆 载体构建 |
| 文章编号： | 1007-8738（2007）07-0665-03 |
| 修稿时间： | 2006-12-18 |
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