人脂肪组织来源的干细胞体外诱导为角膜上皮样细胞的分化潜能

目的 初步探讨人脂肪组织来源的干细胞(human adipose-derived stem cells,hADSC)体外诱导为角膜上皮样细胞的分化潜能.方法 分离、纯化、体外扩增hADSC,流式细胞术鉴定所获得细胞的CD29+、CD34-、CD49d+、CD105+、CD106-的表达情况.成脂、成骨诱导鉴定其多向分化潜能.在DMEM/F12体系、KM体系及上述二者等体积混合的KM/DMEM/F12体系内添加不同梯度浓度的生长因子对hADSC进行体外诱导:0μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1、30μg·L-1、40μg·L-1、50μg·L-1的表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF),及50μg·L-1 EGF+10μg·L-1 碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和50μg·L-1 EGF+20 μg·L-1 bFGF.连续诱导21 d,观察hADSC形态学的改变及第21天时角膜特异性蛋白AE5(CK3/CK12)的免疫化学表达情况,比较不同培养体系及不同浓度生长因子对hADSC诱导作用的差异.结果 流式细胞仪测定传3-5代的细胞CD34-、CD106-、CD29+、CD49d+、CD105+.成脂、成骨体外诱导14 d后.油红O、碱性磷酸酶染色阳性率分别为74.6%和29.3%.KM体系中加入终浓度为0～50μg·L-1 EGF诱导21d后,hADSC AE5阳性细胞率均占90%以上.其中,40μg·L-1EGF诱导下的AE5阳性细胞率为98.7%,50μg·L-1 EGF可达到100%.而加入bFGF的hADSC 则为AE5弱阳性.而另2个体系对各浓度ECF、bFGF诱导的hADSC的作用均为阴性.结论 人吸脂术废弃液中可获得大量高纯度脂肪组织来源的干细胞,经体外条件诱导具备向角膜上皮样细胞分化潜能.添加EGF的角质细胞培养液有利于其分化,并具有浓度依赖性,bFGF则对分化有抑制性作用.

Differential potential of human adipose-derived stem cells induced into corneal epithelial-like cells in vitro