| 大鼠Atohl真核表达载体pAtoh1-IRES2-EGFP的构建及转染293T细胞的研究 |
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| 引用本文： | 郑国玺,朱珠,祝康,侯瑾,韦俊荣,许珉. 大鼠Atohl真核表达载体pAtoh1-IRES2-EGFP的构建及转染293T细胞的研究[J]. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志, 2011, 25(16) |
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| 作者姓名： | 郑国玺 朱珠 祝康 侯瑾 韦俊荣 许珉 |
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| 作者单位： | 西安交通大学医学院第二附属医院耳鼻咽喉头颈外病院,西安,710004 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，陕西省科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 目的:利用基因工程方法克隆SD大鼠Atohl基因编码区序列,构建Atohl的真核表达载体pA-tohl-IRES2-EGFP,并验证其在293T细胞中的表达.方法:通过RT-PCR从SD大鼠结肠组织内扩增出Atohl基因全长CDS序列,并TA克隆于PMD-19T载体中.纯化回收的目的片段测序后连接于真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,构建pAtohl-IRES2-EGFP真核表达载体.再次测序后脂质体介导重组质粒转染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达.结果:测序后将扩增得到的大鼠Atohl CDS序列与GeneBank公布的参考序列对比,有两处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致,两处碱基应为单核苷酸多态性,突变为无义突变,不影响蛋白表达.双酶切和测序结果证明Atohl已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,重组质粒转染293T细胞24 h后荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达.结论:获得正确Atohl编码序列,真核表达载体pAtohl-IRES2-EGFP构建成功并可以在293T细胞中表达,为进一步对感音神经性聋的基因治疗奠定了基础.
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| 关 键 词： | 听觉丧失,感音神经性 Atohl 基因克隆 真核表达载体 |
The cloning and sequencing of SD rat Atohl gene CDS region |
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| ZHENG Guoxi,ZHU Zhu,ZHU Kang,HOU Jin,WEI Junrong,XU Min. The cloning and sequencing of SD rat Atohl gene CDS region[J]. Journal of clinical otorhinolaryngology, head, and neck surgery, 2011, 25(16) |
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| Authors: | ZHENG Guoxi ZHU Zhu ZHU Kang HOU Jin WEI Junrong XU Min |
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