慢病毒介导shRNA特异性沉默促肝细胞再生磷酸酶1基因表达抑制舌癌细胞迁移侵袭能力

目的：探讨特异性沉默促肝细胞再生磷酸酶1（phosphatase of regenerating liver cell-1，PRL-1）基因表达对舌癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法：设计、合成5条针对PRL-1基因的短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）干扰序列，构建于慢病毒载体质粒中，PCR电泳及基因测序验证。转染293T细胞，Western blot筛选最佳干扰序列，包装产生慢病毒。转染TCA8113细胞，筛选、建立稳定转染细胞株；real-time PCR检测PRL-1基因沉默效率；划痕实验和Transwell实验分别比较慢病毒转染细胞（KD组）、空病毒转染细胞（NC组）及TCA8113细胞（CON组）迁移、侵袭能力变化。结果：PCR电泳及基因测序证实5条shRNA序列定向插入慢病毒载体质粒中。Western blot筛选出PRL-1-shRNA-1基因沉默效率最高，包装获得慢病毒滴度为 7×108 TU/ml。通过转染、筛选，建立了TCA8113细胞稳定转染细胞株；real-time PCR测得PRL-1基因mRNA表达明显下降（F=809.120，P=0.000）；PRL-1基因沉默后细胞迁移能力降低，穿过人工基底膜的细胞数KD组（25.5±0.4）明显少于NC组（81.5±2.0）和CON组（88.5±2.3）（F=1 092.970，P=0.000）。结论：沉默PRL-1基因表达能有效抑制舌癌细胞迁移、侵袭能力。

Suppressing migration and invasion potencies of tongue carcinoma cells by lentiviral victor mediated shRNA specially silencing of phosphatase of regenerating liver cell-1 gene expression