干扰核仁磷酸蛋白对人白血病OCI/AML3细胞凋亡的影响及其机制 |
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作者姓名: | 王 娟 陈莎娜 全 静 贺金刚 张帅帅 鲜敬荣 张 伶 |
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作者单位: | 重庆医科大学检验医学院血液教研室、临床检验诊断学教育部重点实验室、重庆市重点实验室,重庆 400016 |
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摘 要: | 目的:探讨抑制核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)1基因对人白血病细胞凋亡的影响及相关机制。方法:将空载慢病毒pGIPZ和NPM干扰慢病毒shNPM分别感染携带NPM1突变的OCI/AML3白血病细胞株以及对照白血病细胞株HL60。采用qRT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测白血病细胞的shNPM组以及Mock和pGIPZ组细胞及NPM1 A型突变(NPM1-mA)基因和蛋白的表达,流式细胞仪和瑞氏染色法观察OCI/AML3的shNPM组以及Mock和pGIPZ组细胞凋亡情况,qRT-PCR和Western blot检测OCI/AML3的shNPM组以及Mock和pGIPZ组凋亡相关蛋白(Bax/Bcl-2)和p-ERK信号分子表达;流式细胞仪检测丝裂原活化蛋白激酶/胞外信号调节激酶信号通路抑制剂(PD98059)处理后OCI/AML3的shNPM组以及Mock和pGIPZ组细胞凋亡率的改变。结果:干扰NPM1明显抑制OCI/AML3细胞株NPM1-mA的mRNA水平(F=20.078;P=0.000,PMock vs. shNPM=0.001,PpGIPZ vs. shNPM=0.003,PMock vs. pGIPZ=0.333)和蛋白水平,伴有胞质NPM突变蛋白表达明显减弱;干扰NPM1能明显上调OCI/AML3细胞凋亡率 (F=25.236,P=0.000,PMock vs. shNPM=0.001,PpGIPZ vs. shNPM=0.001,PMock vs. pGIPZ=0.729),同时光镜下观察到干扰组细胞出现凋亡小体等凋亡形态学特征。此外,干扰NPM1可上调OCI/AML3细胞中促凋亡分子Bax的蛋白和mRNA表达(F=7.649,P=0.000;PMock vs. shNPM=0.015,PpGIPZ vs. shNPM=0.015,PMock vs. pGIPZ=0.984)、下调抗凋亡分子Bcl-2的蛋白和mRNA表达(F=5.190,P=0.000;PMock vs. shNPM=0.034,PpGIPZ vs. shNPM=0.029,PMock vs. pGIPZ=0.909);干扰NPM1能明显下调p-ERK的表达,PD98059抑制剂阻断MAPK通路可促进OCI/AML3细胞凋亡(F=25.643,P=0.007)。结论:NPM1突变基因在白血病细胞抗凋亡特性中发挥重要作用,潜在的分子机制可能与ERK信号分子及Bax/Bcl-2表达有关。
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关 键 词: | 白血病;核仁磷酸蛋白;基因突变;OCI/AML3细胞;凋亡 |
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