干扰核仁磷酸蛋白对人白血病OCI/AML3细胞凋亡的影响及其机制

目的：探讨抑制核仁磷酸蛋白（nucleophosmin，NPM）１基因对人白血病细胞凋亡的影响及相关机制。方法：将空载慢病毒pGIPZ和NPM干扰慢病毒shNPM分别感染携带NPM1突变的OCI/AML3白血病细胞株以及对照白血病细胞株HL60。采用qRT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测白血病细胞的shNPM组以及Mock和pGIPZ组细胞及NPM1 A型突变（NPM1-mA）基因和蛋白的表达，流式细胞仪和瑞氏染色法观察OCI/AML3的shNPM组以及Mock和pGIPZ组细胞凋亡情况，qRT-PCR和Western blot检测OCI/AML3的shNPM组以及Mock和pGIPZ组凋亡相关蛋白（Bax/Bcl-2）和p-ERK信号分子表达；流式细胞仪检测丝裂原活化蛋白激酶/胞外信号调节激酶信号通路抑制剂（PD98059）处理后OCI/AML3的shNPM组以及Mock和pGIPZ组细胞凋亡率的改变。结果：干扰NPM1明显抑制OCI/AML3细胞株NPM1-mA的mRNA水平（F=20.078；P=0.000，PMock vs. shNPM=0.001，PpGIPZ vs. shNPM=0.003，PMock vs. pGIPZ=0.333）和蛋白水平，伴有胞质NPM突变蛋白表达明显减弱；干扰NPM1能明显上调OCI/AML3细胞凋亡率 （F=25.236，P=0.000，PMock vs. shNPM=0.001，PpGIPZ vs. shNPM=0.001，PMock vs. pGIPZ=0.729），同时光镜下观察到干扰组细胞出现凋亡小体等凋亡形态学特征。此外，干扰NPM1可上调OCI/AML3细胞中促凋亡分子Bax的蛋白和mRNA表达（F=7.649，P=0.000；PMock vs. shNPM=0.015，PpGIPZ vs. shNPM=0.015，PMock vs. pGIPZ=0.984）、下调抗凋亡分子Bcl-2的蛋白和mRNA表达（F=5.190，P=0.000；PMock vs. shNPM=0.034，PpGIPZ vs. shNPM=0.029，PMock vs. pGIPZ=0.909）；干扰NPM1能明显下调p-ERK的表达，PD98059抑制剂阻断MAPK通路可促进OCI/AML3细胞凋亡（F=25.643，P=0.007）。结论：NPM1突变基因在白血病细胞抗凋亡特性中发挥重要作用，潜在的分子机制可能与ERK信号分子及Bax/Bcl-2表达有关。