Gadd45α对绒毛外滋养细胞迁移和侵袭能力影响的相关研究

目的：研究人生长阻滞和DNA损伤45α（growth arrest and DNA damage 45 alpha，Gadd45α）基因对滋养细胞HTR8/SV－neo增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学功能的影响，探讨其在子痫前期（preeclampsia，PE）发生发展中的可能作用。方法：构建Gadd45α短发夹干扰RNA，以阴性对照组作为参照，转染人滋养细胞HTR8/SVneo，即分为实验组（si-Gadd45α）和阴性对照组（si-NC）进行实验；应用流式细胞仪检测转染效率，并应用qRT-PCR和Western blot检测转染后各组细胞中Gadd45α mRNA和蛋白表达水平；采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）显色法检测转染后各组细胞增殖能力；应用流式细胞仪对转染后各组细胞进行细胞凋亡分析；采用Transwell法检测转染后各组细胞迁移和侵袭能力；采用早孕绒毛外植体培养模型观察敲除Gadd45α基因后对绒毛外滋养细胞外生性迁移能力的影响；收集各组细胞培养上清液，明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）的表达，蛋白免疫印迹检测基质金属蛋白酶组织抑制因子（tissue inhibitors of MMPs，TIMPs）的表达。结果：流式细胞仪检测转染效率约为 90％；转染后实验组较对照组Gadd45α mRNA的表达量约降低80%，蛋白表达水平约下降70%，差异均有统计学意义（P<0.01），证明干扰Gadd45α表达成功。MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡，结果显示实验组和对照组细胞增殖和凋亡均无统计学差异（P >0.05）。Transwell实验表明干扰Gadd45α后HTR8/SVneo侵袭能力明显增加，约为对照组的1.65倍；迁移能力也明显增加，约为对照组的2倍，均有统计学差异（P<0.01）。早孕绒毛外植体培养结果显示：与阴性对照组的绒毛相比，Gadd45α干扰片段处理的绒毛外滋养细胞外生性迁移的距离明显增加，差异有统计学意义（P=0.005）。明胶酶谱实验结果显示干扰Gadd45α后基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinases，MMP-2）和MMP-9的活性增强，而Western blot检测发现其抑制因子TIMP-1和TIMP-2相应地下降（P<0.01）。结论：推测Gadd45α可能是通过调控蛋白酶的活性来抑制滋养细胞的迁移和侵袭，从而参与PE的发生发展。