结核分枝杆菌MPT64蛋白的表达，纯化及初步应用

目的 获得重组MPT64蛋白，研究其特性，评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法 应用基因工程技术表达、纯化MPT64蛋白，通过Western blotting分析其抗原性。分别以结核分枝杆菌PPD或纯化的rMPT64蛋白为抗原，通过ELISA方法及结核病一步法检测血清中抗结核抗体。结果 重组质粒pE T15b-MPT64测序表达除83位密码子由CCA突变为CCG外，其余密码子均与报道的相同，但其氨基酸序列无变化。它在大肠杆菌BL21（DE3）细胞内以包涵体形式存在，表达量占菌体总蛋白的20－30％，分子量约26kDa,Western blotting分析它与抗结核分要支杆菌多克隆抗体具有良好的免疫反应性。纯化后的rMPT64样品经SDS－PAGE和光密度扫描分析表明其纯度约为80％左右，每100ml培养菌可获得10mg左右的重组蛋白。以33例正常人血清的OD值＋2S为正常界限值，PDD的特异性和敏感性分别为 94％（31／33）、63.7%(21/33)、66.7%;rMPT64纯化蛋白分别为94%(31/33)、30.3(10/33)；一步法分别为88％（29／33）。结论 pET15b－MPT64大肠杆菌工程菌能以包涵体形式高效表表重组 MPT64蛋白，该蛋白具有较高的抗性和免疫反应性。rMPT64纯化蛋白有可能成为结核病血清学诊断的组合抗原之一。