活血通络药物对膝骨关节炎小鼠凋亡软骨细胞体外干预的影响

目的 体外培养膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)小鼠凋亡软骨细胞模型,对凋亡软骨细胞模型进行形态学观察和鉴定,传代培养第一代凋亡软骨细胞模型.培养成功后,分别以不同浓度的骨痹合剂以及氨糖美辛、生理盐水干预后,进行形态学观察和绘制细胞生长曲线,确定凋亡软骨细胞变化最明显的时间点以及促进凋亡软骨细胞增殖的最佳给药浓度,观察活血通络药物对凋亡软骨细胞的影响.方法 取SPF级小鼠80只,20只用于软骨细胞取材,60只用于含药血清制备.首先取正常小鼠、KOA造模小鼠各10只,处死后取软骨细胞,对原代细胞进行传代培养,培养成功后对小鼠正常软骨细胞和小鼠KOA退变软骨细胞进行形态特征染色观察以及细胞比较鉴定.取SPF小鼠60只,随机分为骨痹合剂组、氨糖美辛组、生理盐水组,每组20只,分别以3种药物灌胃3d后取含药血清保存备用.以第一代软骨细胞,加入5％、10％、20％不同浓度骨痹合剂、氨糖美辛、生理盐水含药血清进行细胞干预,2、4、6、8 d后,同时观察3组血清不同药含药浓度分别对凋亡软骨细胞模型增殖的影响.结果 由甲苯胺蓝染色后发现,正常软骨细胞以及KOA软骨细胞均成功培养及传代.检测后发现,KOA模型分离出的软骨细胞凋亡程度较高.经含药血清干预后发现,骨痹合剂和氨糖美辛均抑制细胞凋亡,促进细胞增殖,对细胞起保护作用.经MTT检测后发现骨痹合剂组中,10％含药血清相对于5％和20％含药血清浓度更加促进细胞增殖,说明10％含药血清浓度相对为最佳浓度,2d的时间点各组增殖变化最为明显.结论 10％的含骨痹合剂血清相较其余组别可更好地抑制小鼠KOA软骨细胞凋亡,促进软骨细胞增殖.

An observation of the effect of extraorgan medicine intervention on chondrocyte apoptosis of mice with knee osteoarthritis