不同重组病毒载体在大鼠骨髓间充质干细胞中的转染效率及基因表达

目的：探讨不同的重组病毒载体对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞（rMSCs）的转染效率和外源基因表达水平,为利用骨髓间充质干细胞进行细胞和基因治疗提供实验依据。方法：采用淋巴细胞分离液、密度梯度离心及体外培养方法分离rMSCs,流式细胞仪检测细胞表面CD11b、CD45和CD90的表达鉴定细胞类型。进一步用携带绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的重组Ad5-EGFP、Ad5F35-EGFP、rAAV1/2-EGFP、rAAV2-EGFP及Lentivirus-EGFP转染体外培养的rMSCs,荧光显微镜观察、流式细胞仪检测EGFP阳性率和荧光强度。结果：rMSCs细胞表面CD11b、CD45和CD90阳性率分别为（14.1±3.3）%、（1.1±0.4）%和（82.3±5.7）%。Ad5-EGFP按10、100和1000MOI转染rMSCs,2d后流式细胞仪检测,EGFP阳性率分别为（33.6±2.7）%、（88.6±1.0）%及（99.9±0.1）%,荧光强度为4.4±0.3、39.8±1.5及811.4±3.9;Ad5F35-EGFP按10、100和1000MOI转染rMSCs,2d后阳性率分别为（96.9±0.4）%、（99.9±0.1）%及（99.7±0.1）%,荧光平均强度为369.3±14.8、895.4±7.5及703.2±38.4;rAAV1/2-EGFP及rAAV2-EGFP按1×104和1×105vg/细胞转染rMSCs,6d后阳性率分别为（0.94±0.31）%及（1.30±0.36）%,和（2.16±0.38）%及（3.90±0.33）%;LV-EGFP按30（TU/细胞）转染rMSCs,6d后阳性率为（60.5±3.2）%,荧光强度为27.0±3.6。结论：Ad5、Ad5F35及LV能够有效转染体外培养的rMSCs并表达外源基因,转染效率与病毒的用量间存在量效关系。

Transfection efficacy and gene expression of different recombinant viral vectors in rat mesenchymal stem cells in vitro