| 水蛭素基因毕赤酵母表达载体的构建及高拷贝稳定整合菌株的筛选 |
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| 引用本文： | 龙铟,刘家云,刘莉,王宗仁.水蛭素基因毕赤酵母表达载体的构建及高拷贝稳定整合菌株的筛选[J].第四军医大学学报,2004,25(13):1228-1231. |
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| 作者姓名： | 龙铟 刘家云 刘莉 王宗仁 |
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| 作者单位： | 第四军医大学西京医院中医科,陕西,西安,710033;第四军医大学西京医院检验科,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部药理学教研室,陕西,西安,710033 |
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| 摘 要： | 目的:构建水蛭素变异体HV1毕赤酵母分泌型表达载体,获得高拷贝稳定整合菌株,为大量获得重组水蛭素蛋白,进行功能研究及其临床应用奠定基础. 方法:根据水蛭素HV1的氨基酸序列及毕赤酵母偏爱的密码子,设计HV1编码基因,分为8条寡核苷酸片段进行DNA合成,经磷酸化、退火、连接和PCR扩增得到优化的HV1全长基因,测序结果正确的基因序列插入酵母表达载体pPIC9α分泌信号下游,再亚克隆入高拷贝载体pPIC9K,得到pPIC9K-HV1,SalI线性化后转化毕赤酵母GSM1168,G418梯度筛选转化菌,PCR鉴定目的基因的整合. 结果:获得了水蛭素毕赤酵母表达载体pPIC9K-HV1,G418抗性筛选得到高拷贝菌株,PCR证实目的基因已整合到毕赤酵母染色体中. 结论:成功构建了水蛭素HV1毕赤酵母表达载体,获得了高拷贝稳定整合菌株,为大规模表达纯化HV1蛋白及其临床应用奠定了基础.
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| 关 键 词： | 水蛭素 毕赤酵母 基因重组 |
| 文章编号： | 1000-2790(2004)13-1228-04 |
| 修稿时间： | 2004年1月8日 |
Construction of hirudin expression vectors and screening of stable multicopy integrants in Pichia pastoris |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | hirudin Pichia pastoris gene recombination |
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