| RNA干扰对流感病毒NP和PA基因表达及病毒增殖的抑制 |
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| 引用本文： | 李瑶琛,赵志刚,李康生.RNA干扰对流感病毒NP和PA基因表达及病毒增殖的抑制[J].第四军医大学学报,2006,27(8):681-685. |
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| 作者姓名： | 李瑶琛 赵志刚 李康生 |
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| 作者单位： | 汕头大学医学院,微生物学与免疫学教研室,广东,汕头,510041;汕头大学医学院,第二附属医院泌尿外科,广东,汕头,510041 |
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| 摘 要： | 目的:应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对流感病毒NP或/和PA基因的siRNA抑制NP或/和PA基因的表达及抑制流感病毒在MDCK细胞中的增殖. 方法: 分别构建针对NP,PA及同时干扰NP和PA的三种siRNA表达质粒pEGFP/NP,pGenesil/PA和pEGFP/NP PA,转染MDCK后,H5N1亚型流感病毒感染细胞,荧光显微镜判断转染效率,蛋白质印迹和半定量RT-PCR检测NP及PA蛋白表达及基因转录水平的变化,并在不同时间点检测细胞培养上清中的血凝值(HA),观察siRNA抑制流感病毒增殖的能力. 结果: 荧光显微镜结果表明,重组质粒转染效率达65.0%. 蛋白质印迹结果表明,重组质粒pEGFP/NP和pEGFP/NP PA均能抑制NP蛋白在MDCK细胞内的表达,两者的抑制率分别为64.5%和69.6%. 半定量RT-PCR检测到pEGFP/NP质粒在MDCK细胞内对NP基因的转录抑制率为66.0%;pGenesil/PA质粒对PA基因的转录抑制率为63.0%;pEGFP/NP PA质粒对NP和PA基因的转录同时抑制率,分别为71.4%和69.3%. 而对照质粒pEGFP/HK对NP或/和PA基因的蛋白表达及转录均没有抑制作用. HA结果表明,三种质粒均能抑制流感病毒在MDCK细胞中的增殖,以pEGFP6/NP PA的作用最为显著,它们抑制流感病毒增殖的能力分别为87.0%,75.0%和96.9%. 结论: NP或/和PA基因的siRNA质粒可明显抑制NP或/和PA基因的转录和表达,并有效地抑制流感病毒在MDCK细胞中的增殖.
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| 关 键 词： | RNA干扰 正粘病毒科 MDCK细胞株 NP基因 PA基因 |
| 文章编号： | 1000-2790(2006)08-0681-05 |
| 收稿时间： | 2005-08-29 |
| 修稿时间： | 2005-10-20 |
RNA interference mediated inhibition of influenza virus NP and PA gene expressions and multiplication in MDCK cells |
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| LI Yao-Chen,ZHAO Zhi-Gang,LI Kang-Sheng.RNA interference mediated inhibition of influenza virus NP and PA gene expressions and multiplication in MDCK cells[J].Journal of the Fourth Military Medical University,2006,27(8):681-685. |
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| Authors: | LI Yao-Chen ZHAO Zhi-Gang LI Kang-Sheng |
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| Institution: | 1. Department of Microbiology and Immunology, 2 Department of Urology, Second Affiliated Hospital, Medical College, Shantou University, Shantou 510041, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNA interferece orthomyxoviridae MDCK cell line NP gene PA gene |
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