| EBV－DNA酶全基因扩增克隆和鉴定 |
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| 引用本文： | 朱振宇,严世荣,黄迪,陈尚武,马涧泉.EBV－DNA酶全基因扩增克隆和鉴定[J].中山大学学报(医学科学版),1995(4). |
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| 作者姓名： | 朱振宇 严世荣 黄迪 陈尚武 马涧泉 |
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| 作者单位： | 中山医科大学生物化学教研室，湖北郧阳医学院生物化学教研室，中山医科大学肿瘤所生化室 |
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| 摘 要： | 根据Ｂｅａｒ的ＥＢ病毒（ＥＢＶ）基因全序列，设计包括ＥＢＶ特异性ＤＮＡ酶全基因的一对引物，在引物上设计有一个ＳａｌⅠ切点，以便于克隆。选用蛋白酶Ｋ裂解的Ｒａｊｉ细胞ＤＮＡ为模板，扩增出一条１４６０ｂｐ的特异条带，纯比后经ＴａｑⅠ酶切形成１１９８ｂｐ和２６２ｂｐ的两个片段，证实该扩增片段即为ＥＢＶ特异性ＤＮＡ酶的全基因片段。以ＪＭ１０３为宿主菌，以高效表达质粒ＰＢＶ２２１为载体，按常规方法作酶切、连接、转化，最后在含氨中青霉素的培养基上挑取单菌落扩大培养，用快速法少量制备质粒ＤＮＡ。根据质粒电泳结果粗筛，再行ＢａｍＨⅠ酶切初步鉴定，确定质粒大小为５１１７（１４５１＋３６６６）ｂｐ的菌落为阳性克隆。先后用ＢａｍＨⅠ和ＴａｑⅠ消化阳性重组体，以形成１２００ｂｐ和３９１７ｂｐ两片段的确定为正向连接重组体。本实验首次将ＥＢＶ－ＤＮＡ酶全基因片段克隆到高效表达载体ｐＢＶ２２１上获得成功
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| 关 键 词： | 爱波斯坦－巴尔病毒 聚合酶链反应 克隆，分子 DNA酶基因 |
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