类风湿关节炎滑膜CD68阳性细胞筛选的意义

目的：探讨用CD68作为细胞标志筛选类风湿关节炎和正常滑膜组织中的滑膜巨噬细胞CD68^+细胞，并观察筛选后细胞的活性及特性。方法：滑膜组织来源于2003-02／2004-03南方大学南方医院脊柱骨病科收治的12例住院患者。类风湿关节炎组6例源自全膝关节置换术或经关节镜滑膜切除术的类风湿关节炎患者，正常滑膜组6例来自无关节炎病史的半月板损伤患者，均经病理诊断证实。从滑膜组织中分离滑膜细胞，免疫磁珠法筛选滑膜CD68^+和CD68^-细胞，用流式细胞仪检测筛选效能；用免疫组化染色观察类风湿关节炎组和正常滑膜组筛选前后滑膜CD68^+细胞所占比例；以四甲基偶氮唑盐比色法观察筛选后细胞体外培养增殖活性。结果：所获12例滑膜组织全部进入结果分析。①滑膜细胞分离后观察：滑膜细胞24h后贴壁生长，滑膜巨噬样细胞在类风湿关节组的比例较正常滑膜组高。②筛选后滑膜细胞的观察结果：免疫磁珠法筛选的CD68^+和CD68^-细胞均在2h内开始贴壁，24h后CD68^-细胞呈极向排列生长，贴壁能力强于CD68^+细胞。筛选后的滑膜CD68^+细胞与磁珠结合在一起，具有巨噬样细胞形态，胞周可有突起，分裂增殖较慢，但在体外能传数代；CD68^-细胞未与磁珠结合，表现为长梭形成纤维细胞样形态，细胞分裂增殖迅速。③CD68^+细胞的纯度分析：经流式细胞仪分析细胞纯度为93．6%，主峰右移，细胞平均体积增大。滑膜CD68^-细胞不能被FITC标记。④滑膜细胞CD68的表达观察：筛选后CD68^+细胞均为棕黄色。细胞核大、较疏松，细周有突起。CD68^-细胞基本为成纤维样细胞，胞浆未被黄染，细胞核位于细胞中央，呈卵圆形，核仁明显。⑤两组滑膜细胞体外增殖速度：在体外均有不同程度增殖活性。类风湿关节炎和正常滑膜CD68^-细胞增殖速度快于同一组织来源滑膜CD68^+细胞的增殖速度(0．680&;#177;0．047)，(0．236&;#177;0．014)；(0．605&;#177;0．031)，(0．195&;#177;0．019)；τ=21．989，P&;lt;0．05]。类风湿关节炎滑膜CD68^+细胞增殖速度快于正常滑膜CD68^+细胞的增殖速度(0.236&;#177;0．014)，(0．195&;#177;0．019)；τ=4．149，P&;lt;0．05]。结论：CD68可作为一种标志来筛得滑膜细胞中的巨噬细胞和其他滑膜细胞，筛选后滑膜细胞均具有良好增殖活性。CD68^+细胞具有典型巨嗜样细胞形态，CD68^-细胞主要为成纤维样细胞，两种细胞区分程度好有助于临床对疾病活动期和严重程度判断。