| 摘 要： | 目的研究miR-206对卵巢颗粒细胞凋亡的影响以及其作用的信号通路。方法 Target Scan软件预测和双荧光素酶报告基因法验证miR-206和热休克蛋白10(Heat shock protein 10,HSP10)的相互作用。采用Western blot检测过表达或抑制miR-206对HSP10的蛋白水平的影响。将miR-206模拟剂或miR-206抑制剂转染到卵巢颗粒细胞中,以正常组为对照,用Real-time PCR检测凋亡基因Bcl-2、Bax、caspase-3的表达。过表达miR-206后,用免疫荧光检测Bcl-2和caspase-3的表达。结果 Target Scan软件分析HSP10可能是miR-206的靶基因,双荧光素酶报告基因法进一步验证了miR-206和HSP10具有相互作用。过表达或降低miR-206表达,HSP10的蛋白水平变化趋势相反。过表达miR-206可以抑制Bcl-2的表达,促进Bax和caspase-3的表达;抑制miR-206表达可以促进Bcl-2的表达,抑制Bax和caspase-3的表达。过表达miR-206增强了caspase-3的荧光强度和抑制了Bcl-2的荧光强度。结论 (1)miR-206可能靶向HSP10,HSP10 3'UTR和miR-206可能的结合位点;(2)miR-206的过表达抑制了HSP10的转录活性;(3)miR-206表达的改变影响HSP10的蛋白水平;(4)miR-206表达变化影响了凋亡相关基因的表达;由此表明miR-206可能通过抑制HSP10信号通路调控颗粒细胞的凋亡参与卵巢功能的调节。
|
