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| Wnt3a转染小鼠胸腺激酶缺陷细胞及对β-连环素蛋白亚细胞分布的影响 | |
| 引用本文： | 尚延昌,王淑辉,张成,熊符,李勇,刘正山,许勇峰. Wnt3a转染小鼠胸腺激酶缺陷细胞及对β-连环素蛋白亚细胞分布的影响[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2010, 14(2). DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.02.026 |
| 作者姓名： | 尚延昌 王淑辉 张成 熊符 李勇 刘正山 许勇峰 |
| 作者单位： | 1. 解放军总医院南楼神经科,北京市,100853;中山大学附属第一医院神经科,广东省广州市,510080 2. 首都医科大学附属北京友谊医院神经科,北京市,100050 3. 中山大学附属第一医院神经科,广东省广州市,510080 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目 |
| 摘 要： | 背景:Wnt信号通路是动物胚胎发育过程中重要的调控通路,建立Wnt信号通路细胞模型对于研究该通路有重要意义.目的:以Wnt3a真核表达质粒转染小鼠胸腺激酶缺陷细胞,构建能够持续激活Wnt信号通路的体外细胞模型,观察经典Wnt信号通路对β-1连环素蛋白亚细胞分布的影响.方法:将扩增真核表达质粒pgk-Wnt3a-pcDNA3.0进行酶切鉴定.应用脂质体转染技术将真核表达质粒pgk-Wnt3a-pcDNA3.0和对照质粒pgk-neo-pcDNA3.0转染入胸腺激酶缺陷细胞,经过G418筛选后挑出细胞克隆,扩大培养.应用RT-PCR技术检测表达产物,应用间接免疫荧光技术检测Wnt3a对鼠胸腺激酶缺陷细胞β-catenin亚细胞分布的影响.结果与结论:Wnt3a质粒经过酶切鉴定证明所扩增的质粒为目的质粒.经过G418筛选3周后,挑选10个稳定转染的细胞克隆,进行RT-PCR检测,可见在L-Wnt3a细胞的cDNA产生1条长度为320 bp亮带,表明扩增产物为所需要的目的片段,Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞后有Wnt3a在mRNA转录水平表达.转染对照质粒的胸腺激酶缺陷细胞cDNA未扩增出目的条带.免疫荧光检测可见Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞后细胞浆中有Wnt3a蛋白表达,转染对照质粒组无表达.Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞核中可见明亮的红色荧光,提示β-连环素蛋白在胸腺激酶缺陷细胞-Wnt3a细胞聚集并进入细胞核中.转染对照质粒的胸腺激酶缺陷细胞浆未见有明显β-连环素蛋白着色,细胞核中无β-连环素蛋白的聚集.构建了能够持续激活Wnt信号通路的体外细胞模型,真核表达Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞能够获得稳定表达,促进胸腺激酶缺陷细胞浆中β-连环素蛋白向细胞核转移. |
| 关 键 词： | 胸腺激酶缺陷细胞 β-连环素蛋白 |
Transfection of mouse L-M (TK-) cells with Wnt3a and its effect on the subcellular distribution of beta-catenin |
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| Shang Yan-chang,Wang Shu-hui,Zhang Cheng,Xiong Fu,Li Yong,Liu Zheng-shan,Xu Yong-feng. Transfection of mouse L-M (TK-) cells with Wnt3a and its effect on the subcellular distribution of beta-catenin[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2010, 14(2). DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.02.026 | |
| Authors: | Shang Yan-chang Wang Shu-hui Zhang Cheng Xiong Fu Li Yong Liu Zheng-shan Xu Yong-feng |
| Affiliation: | Shang Yan-chang1,2,Wang Shu-hui3,Zhang Cheng2,Xiong Fu2,Li Yong2,Liu Zheng-shan2,Xu Yong-feng21Department of Geriatric Neurology,The General Hospital of Chinese PLA,Beijing 100853,China,2Department of Neurology,First Affiliated Hospital,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510080,Guangdong Province,3Department of Neurology,Beijing Friendship Hospital,Capital Medical University,Beijing 100050 |
| Abstract: | |
| Keywords: | Wnt3a |
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