TGF-β1对皮肤组织特异性Smad4基因敲除小鼠组织培养影响的研究

目的应用组织块培养的方法，观察TGF-β1及其受体抑制剂SB-431542对皮肤组织特异性Smad4基因敲除小鼠与野生型小鼠表皮细胞增殖的影响。方法皮肤组织特异性Smad4基因敲除小鼠与野生型小鼠，制成背部烫伤模型。伤后5d取创面边缘皮肤组织，剪成1mm×2mm皮块，行组织块培养。实验分为6组，分别是：（1）Smad4基因敲除组（A组）；（2）Smad4基因敲除＋SB431542组（B组）；（3）杂合子组（C组）；（4）杂合子＋SB431542组（D组）；（5）野生型组（E组）；（6）野生型＋SB431542组（F组）。B、D、F组加入5×10^-4 MSB431542，作用1h。各组均加入5ng／ml TGF-β1，于37℃，5％C02条件下培养。于培养的第0、8、16、24、32、40、48小时，加入10μM BrdU标记液，标记1h。10％中性甲醛固定。病理切片，免疫组化染色，计算BrdU阳性率。结果TGF-β1可以降低杂合子和野生型小鼠表皮细胞PCNA阳性率和BrdU掺入率，TGF-β1作用于野生型小鼠16h，表皮细胞BrdU掺入率即有明显降低，但对基因敲除组小鼠无该作用，在皮肤组织块培养条件下，预先应用受体抑制剂SB431542作用1h，则TGF-β1的这种作用不再存在。结论TGF-β1对表皮细胞生长具有抑制作用，其受体拮抗剂SB-431542能拮抗这种抑制作用。