| 人衰变加速因子DAF基因真核表达系统的构建 |
| |
| 引用本文： | 徐莉,赵舟宙,刘辉,李文鑫.人衰变加速因子DAF基因真核表达系统的构建[J].中国免疫学杂志,2008,24(12). |
| |
| 作者姓名： | 徐莉 赵舟宙 刘辉 李文鑫 |
| |
| 作者单位： | 武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室,武汉,430072 |
| |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863 计划)课题基金
|
| |
| 摘 要： | 目的：构建含人补体调节蛋白衰变加速因子DAF分子的cDNA编码区的真核重组表达载体pcDNA3-DAF,转染NIH3T3细胞,建立稳定表达人DAF的NIH3T3细胞模型。方法：将人DAF分子的cDNA编码区克隆到真核表达载体pcDNA3,经酶切和测序鉴定后用磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的NIH3T3细胞株。用PCR检测人DAF基因在NIH3T3细胞基因组中的整合;用RT-PCR、Westernblot实验和间接免疫荧光技术分别从RNA水平和蛋白质水平检测人补体调节蛋白分子DAF在细胞株中的表达。结果：成功构建了pcDNA3-DAF重组真核表达载体,并建立了稳定转染的NIH3T3细胞株,成功地表达了目的基因。PCR检测连续传代30次的NIH3T3pcDNA3-DAF细胞,结果显示人DAF基因仍稳定整合在异源细胞的染色体上,并未随着传代而丢失,为稳定的转染细胞株。结论：真核表达载体构建和稳定转染NIH3T3细胞株的建立为进一步研究人DAF功能和多种补体调节蛋白的协同作用奠定基础。
|
| 关 键 词： | 衰变加速因子 NIH3T3细胞 稳定转染 真核表达 |
Establishment of a eukaryotic expressing system for human decay accelerating factor |
| |
| XU Li,ZHAO Zhou-Zhou,LIU Hui,LI Wen-Xin.Establishment of a eukaryotic expressing system for human decay accelerating factor[J].Chinese Journal of Immunology,2008,24(12). |
| |
| Authors: | XU Li ZHAO Zhou-Zhou LIU Hui LI Wen-Xin |
| |
| Institution: | XU Li,ZHAO Zhou-Zhou,LIU Hui,LI Wen-Xin.State Key Lab of Virology,College of Life Sciences,Wuhan University,Wuhan 430072,China |
| |
| Abstract: | Objective:To construct recombinant expressing vector pcDNA3-DAF and to develop the NIH3T3 cell model expess human complement regulatory protein decay accelerating factor(DAF,CD55)stably after transfected.Methods:Human membrane complement regulatory protein(hCRP) DAF cDNA containing the full-length of encoding region was cloned into expressing vector pcDNA3.After identification by restriction enzyme digestion,PCR and sequencing,the recombinant plasmid was transfected into NIH3T3 cells with calcium phosphate-... |
| |
| Keywords: | DAF NIH3T3 cell Stable transfection Eukaryotic expression |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
