| 人类抗凋亡基因bcl-xL的克隆及其在大鼠心肌细胞内的高效表达 |
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| 引用本文： | 廖洪映,张惠忠,陈波,华平,殷香保,蒙荣森,刘启才,熊利华.人类抗凋亡基因bcl-xL的克隆及其在大鼠心肌细胞内的高效表达[J].中山大学学报(医学科学版),2005,26(Z1):50-53. |
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| 作者姓名： | 廖洪映 张惠忠 陈波 华平 殷香保 蒙荣森 刘启才 熊利华 |
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| 作者单位： | 1. 中山大学附属第二医院心胸外科,广东,广州,510120
2. 中山大学附属第二医院医学研究中心,广东,广州,510120
3. 广州医学院医学研究中心,广东,广州,510182 |
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| 摘 要： | 目的]克隆人类抗凋亡基因bcl-xL cDNA,构建两种不同的真核表达载体,评价大鼠心肌细胞表达外源性bcl-xL的效果,并比较不同转染方法对bcl-xL表达的影响.方法]]RT-PCR法从人肝脏组织获取bcl-xL cDNA,连接至pTargeTTM载体,并亚克隆至真核表达载体pEGFP-C1上;细菌内同源重组构建重组腺病毒质粒,腺病毒纯化试剂盒获取高滴度的重组腺病毒;脂质体和腺病毒介导分别转染体外培养的大鼠心肌细胞,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR和免疫细胞化学染色法检测bcl-xL mRNA和bcl-xL蛋白的表达.结果]获取的bcl-xL cDNA测序正确,成功克隆真核表达质粒pEGFP-bcl-xL;病毒颗粒滴度高达5.3×1012 pfu/L;脂质体和腺病毒转染心肌细胞效率分别为40.3%和95.4%,转染后bcl-xL mRNA和bcl-xL蛋白的表达均增加,但两种方法之间差异有统计学意义(P＜0.01).结论]成功获取人类bcl-xZ基因并制备真核表达质粒和重组腺病毒,心肌细胞能高效表达外源性bcl-xL,并以腺病毒介导更为理想.为bcl-xL基因治疗缺血性心脏病提供实验基础.
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| 关 键 词： | 基因 bcl-xL 克隆 载体构建 心肌细胞 基因疗法 |
| 文章编号： | 1672-3554(2005)3S-0050-04 |
| 修稿时间： | 2004年9月3日 |
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