| Hsa-mir-196b慢病毒表达载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 向星宇,马文丽,宋艳斌,姜茂竹,王妮莎,郑文岭.Hsa-mir-196b慢病毒表达载体的构建及鉴定[J].热带医学杂志,2010,10(5). |
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| 作者姓名： | 向星宇 马文丽 宋艳斌 姜茂竹 王妮莎 郑文岭 |
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| 基金项目： | 教育部科学技术研究重点项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建Has-mir-196b慢病毒表达载体并对其进行鉴定.方法 以正常人外周血DNA为模板,PCR扩增得到目的基因.通过却Hpa I/Xho I双酶切及其后的连接将其插入Lentilox 3.7(pLL-3.7)质粒中.PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用pLL-3.7-mir-196b、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三质粒系统共感染HEK-293FT细胞,包装生产慢病毒.将所得病毒悬液梯度稀释后感染HEK293FT细胞,以检测病毒滴度,并用实时定量PCR检测慢病毒感染后Has-mir-196b的表达变化.结果 PCR及测序结果证明成功构建了pLL-3.7-mir-196b重组质粒.所得慢病毒上清滴度为(7.2±101)×107TU/ml.感染慢病毒的239FT细胞中,Has-mir-196b的表达量相对于未感染细胞提高了约24倍.结论 成功构建Has-mir-196b慢病毒表达载体.
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| 关 键 词： | Hsa-mir-196b 慢病毒 肿瘤 |
Construction of Lentiviral Vector for the Expression of Hsa-mir-196b |
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| XIANG Xing-yu,MA Wen-li,SONG Yan-bin,JIANG Mao-zu,WANG Ni-sha,ZHENG Wen-ling.Construction of Lentiviral Vector for the Expression of Hsa-mir-196b[J].Journal Of Tropical Medicine,2010,10(5). |
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| Authors: | XIANG Xing-yu MA Wen-li SONG Yan-bin JIANG Mao-zu WANG Ni-sha ZHENG Wen-ling |
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