| hHGF腺病毒载体的构建及其在人脐带间质干细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 陈圆,李汉华,赵亚娟,吴晓丹,王梅,许晓蒙,谢颖,许文荣.hHGF腺病毒载体的构建及其在人脐带间质干细胞中的表达[J].江苏大学学报(医学版),2010,20(3):190-193,I0001. |
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| 作者姓名： | 陈圆 李汉华 赵亚娟 吴晓丹 王梅 许晓蒙 谢颖 许文荣 |
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| 作者单位： | 1. 江苏大学基础医学与医学技术学院,江苏,镇江,212013
2. 江苏大学第四附属医院产科,江苏,镇江,212001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，江苏省医学领军人才项目，江苏省自然科学基金资助项目，江苏大学科技创新团队和拔尖人才项目，江苏大学大学生科研项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建人重组肝细胞生长因子(human hepatocyte growth factor,hHGF)基因腺病毒载体(Ad-HGF),转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hucMSCs),为转基因治疗提供实验基础.方法:设计含有SalⅠ及XbaⅠ酶切位点的引物,PCR扩增hHGF,将扩增产物克隆到带有绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)标记的pAdTrack-CMV穿梭质粒上.重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183中同源重组,筛选获得含有hHGF的重组腺病毒质粒,PCR、酶切鉴定并测序.重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化,脂质体转染293A细胞,经3轮扩增,制备高效表达的AdGFP/HGF,并转染hucMSCs.结果:重组腺病毒质粒经PCR和SalⅠ,XbaⅠ酶切鉴定,证实含有HGF基因,测序结果和设计片段的序列一致.荧光显微镜下发现293A细胞发光率几乎为100%,感染的hucMSCs亦可表达绿色荧光蛋白.结论:成功构建了hHGF腺病毒表达载体,并获得高滴度的病毒, 能高效感染hucMSCs,为后续研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 肝细胞生长因子 人脐带间质干细胞 腺病毒载体 |
Transfection of human umbilical cord mesenchymal stem cells with recombinant adenovirus carrying human hepatocyte growth factor gene |
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| CHEN Yuan,LI Han-hua,ZHAO Ya-juan,WU Xiao-dan,WANG Mei,XU Xiao-meng,XIE Ying,XU Wen-rong.Transfection of human umbilical cord mesenchymal stem cells with recombinant adenovirus carrying human hepatocyte growth factor gene[J].Journal of Jiangsu University Medicine Edition,2010,20(3):190-193,I0001. |
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| Authors: | CHEN Yuan LI Han-hua ZHAO Ya-juan WU Xiao-dan WANG Mei XU Xiao-meng XIE Ying XU Wen-rong |
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