| 人survivin基因重组腺病毒载体的构建及其在DCs中的表达 |
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| 引用本文： | 李红,刘友生,王长松,葛晓东.人survivin基因重组腺病毒载体的构建及其在DCs中的表达[J].第三军医大学学报,2005,27(9):821-824. |
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| 作者姓名： | 李红 刘友生 王长松 葛晓东 |
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| 作者单位： | 第三军医大学西南医院病理科,重庆,400038;第三军医大学西南医院病理科,重庆,400038;第三军医大学西南医院病理科,重庆,400038;第三军医大学西南医院病理科,重庆,400038 |
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| 摘 要： | 目的构建含有人survivin基因的重组腺病毒载体,为转染树突状细胞构建DC疫苗和基因治疗奠定基础.方法自行设计一对分别含有Kpn Ⅰ和Xhol Ⅰ酶切位点的survivin基因上下游引物,以质粒pCITE/survivin为模板,通过PCR扩增获得survivin基因全部序列.片段回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,获得重组质粒pAdTrack-CMV-survivin.通过Kpn Ⅰ和Xhol Ⅰ双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体pAdTrack-survivin转化包含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183菌.同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒用脂质体介导转染293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒.同时将病毒上清转染树突状细胞,通过观察绿色荧光蛋白的表达以及Western blot分析观察survivin蛋白表达.结果成功构建了含有人survivin基因的重组腺病毒,病毒滴度为1.65×108PFU/ml.在19×103频段附近可见survivin蛋白表达为16.5×103.结论该重组腺病毒载体的构建及成功转染到树突状细胞内表达,为下一步研究人survivin作为靶抗原及基因治疗奠定了基础.
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| 关 键 词： | 腺病毒载体 基因疗法 survivin基因 树突状细胞 |
| 文章编号： | 1000-5404(2005)09-0821-04 |
| 修稿时间： | 2004年12月2日 |
Construction of recombinant adenovirus vector containing human survivin gene and expression in dentritic cells |
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| LI Hong,LIU You-sheng,WANG Chang-song,GE Xiao-dong.Construction of recombinant adenovirus vector containing human survivin gene and expression in dentritic cells[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2005,27(9):821-824. |
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| Authors: | LI Hong LIU You-sheng WANG Chang-song GE Xiao-dong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | adenovirus vector gene therapy survivin dendritic cells |
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