| HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体的构建及其稳定表达细胞株的建立 |
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| 引用本文： | 白文栋,席文锦,王芳,王丽娟,杨韬,彭红艳,孟艳玲,杨安钢.HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体的构建及其稳定表达细胞株的建立[J].细胞与分子免疫学杂志,2012(1):94-96. |
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| 作者姓名： | 白文栋 席文锦 王芳 王丽娟 杨韬 彭红艳 孟艳玲 杨安钢 |
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| 作者单位： | 第四军医大学国家肿瘤生物学重点实验室;第四军医大学免疫学教研室;第四军医大学微生物学教研室;西安交通大学医学院第一附属医院;第四军医大学西京医院内分泌科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(81001015/H1611) |
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| 摘 要： | 目的:构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体,并运用Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达该细胞的CHO工程细胞株。方法:应用PCR技术以pcMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pcDNA5/FRT载体中;通过Flp-InTM定点整合表达系统将e23sFv-Fdt-tBid整合入Flp-lnTM CHO细胞的基因组中一个单拷贝位点上,以适当的潮霉素B筛选定点整合e23sFv-Fdt-tBid cDNA的细胞克隆;通过基因组PCR技术和Westernblot技术检测e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达。结果:成功构建了pcDNA5/FRT-e23sFv-Fdt-tBid表达载体;成功通过Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达e23sFv-Fdt-tBid蛋白的CHO工程细胞株;成功通过基因组PCR技术及基因组PCR技术和Western blot技术检测了e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达。结论:成功地构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体并建立了稳定表达该蛋白的CHO工程细胞株,为该蛋白的应用研究奠定了重要基础。
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| 关 键 词： | 免疫促凋亡蛋白 HER2 真核表达 定点整合 CHO工程细胞株 |
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