含RGD肽基因导入系统介导TGF-β1基因转染对兔骨髓基质干细胞增殖和体外诱导成骨的影响

目的 探讨一种新型靶向性非病毒载体—含RGD肽K16GRGDSPC（记作K16-RGD）介导外源基因转染骨髓基质干细胞（BMSCs）的可行性，观察转化生长因子β1（TGF-β1）基因：转染对BMSCs的增殖和体外诱导成骨的影响。方法固相合成法合成K16-RGD，以其为载体将转化生长因子β1质粒pcDNA3-TGF-β1导入兔BMSCs，以导入空载体pcDNA3作为对照，G418筛选得到阳性细胞集落（分别命名为BMSCs-TGF-β1和BMSCs-pcDNA3），逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测TGF-β1基因的表达；采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法（MTr）和流式细胞仪（FCM）检测细胞体外增殖活性，并进行成骨诱导扩增，检测转基因细胞经成骨诱导后碱性磷酸酶（ALP）活性、骨钙蛋白（OCN）含量、核心结合因子a1（Cbfal）的表达、矿化（钙结节形成）情况。以经诱导的BMSCs—pcDNA3和未转染BMSCs作为对照。结果 RT-PCR显示转基因细胞能高表达TGF-β1，BMSCs-TGF-β1的体外增殖活性明显高于对照组（P〈0．01）；BMSCs-TGF-β1经成骨诱导后表达的成骨特征性表型（ALP、OCN、Cbfal的表达和矿化）与对照组有显著的差异（P〈0．01）。结论 含RGD肽K16-RGD可以作为一种较理想的新型基因转移载体介导外源基因转染BMSCs；TGF-β1可以作为骨组织工程种子细胞BMSCs向成骨细胞定向分化的理想调控因子之一。

Effects on Proliferation and Osteoblastic Phenotype of Rabbit Bone Marrow Stromal Cells Transfected with Transforming Growth Factor-beta 1 Gene Mediated with RGD-containing Peptide Gene Delivery System in vitro