| 地黄RgGGPPS2基因克隆、生物信息学分析及表达分析 |
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| 引用本文： | 赵乐,马利刚,俎梦航,冯卫生,郑晓珂,朱畇昊.地黄RgGGPPS2基因克隆、生物信息学分析及表达分析[J].中草药,2017,48(11):2269-2278. |
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| 作者姓名： | 赵乐 马利刚 俎梦航 冯卫生 郑晓珂 朱畇昊 |
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| 作者单位： | 河南中医药大学药学院, 河南 郑州 450046;呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心, 河南 郑州 450046;河南中医药大学药学院, 河南 郑州 450046;呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心, 河南 郑州 450046;河南中医药大学药学院, 河南 郑州 450046;河南中医药大学药学院, 河南 郑州 450046;呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心, 河南 郑州 450046;河南中医药大学药学院, 河南 郑州 450046;呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心, 河南 郑州 450046;河南中医药大学药学院, 河南 郑州 450046;呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心, 河南 郑州 450046 |
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| 基金项目： | 国家“十二五”科技支撑计划项目（2011BAI06B02）；国家自然科学基金项目（81603232）；河南省科技攻关计划项目（162102310468）；河南中医学院博士科研基金（BSJJ2011-07，BSJJ2011-18） |
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| 摘 要： | 目的为了研究地黄萜类化合物生物合成途径的功能基因,从地黄中克隆了一条新的地黄GGPPS基因(RgGGPPS2),进行生物信息学分析,原核表达、纯化以及基因表达模式分析。方法根据地黄转录组数据中RgGGPPS2基因的序列信息,设计特异性引物,克隆了RgGGPPS2基因的开放阅读框(ORF)序列,构建pET32a-RgGGPPS2原核表达载体,用IPTG在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达RgGGPPS2重组蛋白,荧光定量PCR检测RgGGPPS2基因的组织特异性表达。结果 RgGGPPS2基因的ORF为867 bp,编码289个氨基酸。生物信息学分析结果发现RgGGPPS2蛋白含有2个富含天冬氨酸的基序FARM(first aspartate-rich motif)和SARM(second aspartate-rich motif),RgGGPPS2与芝麻、长春花等双子叶植物中GGPPS蛋白的同源性较高。通过构建pET-32a-RgGGPPS2原核表达载体在大肠杆菌中成功表达RgGGPPS2重组蛋白,利用Ni2+亲和色谱得到了纯化的RgGGPPS2重组蛋白。荧光定量PCR结果显示RgGGPPS2基因在根中表达量最高,其次是叶,茎中最低。结论克隆了RgGGPPS2基因,获得了纯化的RgGGPPS2重组蛋白,为研究RgGGPPS2基因在地黄萜类化合物生物合成途径中的功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 地黄 RgGGPPS2 基因克隆 生物信息学分析 表达分析 |
| 收稿时间： | 2016/11/14 0:00:00 |
Cloning, bioinformatic analysis and expression analysis of RgGGPPS2 gene from Rehmannia glutinosa |
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| ZHAO Le,MA Li-gang,ZU Meng-hang,FENG Wei-sheng,ZHENG Xiao-ke and ZHU Yun-hao.Cloning, bioinformatic analysis and expression analysis of RgGGPPS2 gene from Rehmannia glutinosa[J].Chinese Traditional and Herbal Drugs,2017,48(11):2269-2278. |
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| Authors: | ZHAO Le MA Li-gang ZU Meng-hang FENG Wei-sheng ZHENG Xiao-ke and ZHU Yun-hao |
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| Institution: | School of Pharmacy, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China;Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine Development of Henan Province, Zhengzhou 450046, China;School of Pharmacy, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China;Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine Development of Henan Province, Zhengzhou 450046, China;School of Pharmacy, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China;School of Pharmacy, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China;Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine Development of Henan Province, Zhengzhou 450046, China;School of Pharmacy, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China;Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine Development of Henan Province, Zhengzhou 450046, China;School of Pharmacy, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China;Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine Development of Henan Province, Zhengzhou 450046, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Rehmannia glutinosa Libosch RgGGPPS2 gene cloning bioinformatic analysis expression analysis |
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