粒细胞集落刺激因子对脑小血管病大鼠神经元活性、血管超微结构及神经元核抗原阳性表达的影响

目的探究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对脑小血管病(CSVD)大鼠神经元活性、血管超微结构及神经元核抗原(NeuN)阳性表达的影响。方法2020年1月至2021年1月，将40只SD雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组10只和模型组大鼠30只；采用同种系微栓子体外注入法制备CSVD大鼠模型，最终20只造模成功，再平均分为CSVD模型组(CSVD组)和CSVD模型大鼠给予G-CSF干预治疗组(G-CSF组)，每组10只。造模成功后，将G-CSF组大鼠经皮下注射G-CSF 50 μg/kg，1天1次；假手术组和CSVD组大鼠均经皮下注射等量的生理盐水干预，1天1次。三组大鼠均连续注射7 d。采用苏木精-伊红染色(HE染色)观察海马组织形态学变化，TUNEL检测神经元细胞凋亡情况，透射电镜观察微血管结构和内皮形态，免疫组织化学检测NeuN阳性表达，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NeuN和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达。结果假手术组大鼠脑组织结构没有出现异常；CSVD组大鼠脑组织结构异常，海马区病灶严重，海马组织结构无规则；神经组织大量坏死，神经元缩小；干预后的G-CSF组脑组织结构得到明显改善(P<0.05)。TUNEL检测结果显示，与假手术组神经元细胞凋亡率(21.34±4.43)%相比，CSVD组神经元细胞凋亡率(50.31±2.92)%增多(P<0.05)，G-CSF组神经元细胞凋亡率(30.90±8.10)%较CSVD组明显减少(P<0.05)。假手术组微血管结构正常，CSVD组微血管结构破坏及内皮细胞损伤明显，而G-CSF组较CSVD组微血管结构和内皮细胞损伤得到明显改善(P<0.05)。免疫组织化学结果发现CSVD组大鼠NeuN阳性表达(0.375±0.020)%明显低于假手术组(0.572±0.015)%(P<0.05)；G-CSF组中NeuN阳性表达(0.551±0.012)%较CSVD组明显升高(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示，CSVD组大鼠NeuN(0.11±0.04)mRNA 和VEGF mRNA(0.76±0.31)表达均低于假手术组NeuN(0.48±0.13)mRNA 和VEGF mRNA(1.45±0.21)表达(P<0.05)；G-CSF 组NeuN(0.32±0.11)和VEGF mRNA(1.31±0.26)表达明显高于CSVD 组(P<0.05)。结论G-CSF可改善CSVD大鼠微血管内皮细胞形态、促进神经元存活而减少凋亡发生，同时有效促进NeuN的阳性表达，进而发挥脑保护作用。

Effects of G-CSF on neuronal activity, vascular ultrastructure and positive expression of NeuN in rats with cerebral small vessel disease