| 家兔MT-Ⅰ基因克隆及其在大肠杆菌中的表达与分离 |
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| 引用本文： | 孙颖,贺智敏,杨芳,陈主初,严斌,黄宏科,李廷宝. 家兔MT-Ⅰ基因克隆及其在大肠杆菌中的表达与分离[J]. 生物医学工程学杂志, 2004, 21(1): 76-80 |
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| 作者姓名： | 孙颖 贺智敏 杨芳 陈主初 严斌 黄宏科 李廷宝 |
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| 作者单位： | 1. 中南大学,湘雅医学院,肿瘤研究所,长沙,410078
2. 湖南省润农实业有限公司,长沙,410001 |
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| 基金项目： | 湖南省社会发展科研基金资助项目(OISSY2008-4) |
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| 摘 要： | 采用RT-PCR方法扩增镉诱导后的家兔肝脏金属硫蛋白-Ⅰ(Metallothionein-Ⅰ,MT-Ⅰ)基因的cDNA全长,克隆入原核融合表达载体pQE40,转化大肠杆菌M15.菌落印迹法检测阳性菌株;Western blotting 分析重组融合蛋白的表达方式;经SDS-PAGE电泳后,ImageMaster VDS software 分析融合蛋白诱导表达条件;并采用Ni-NTA agarose纯化融合蛋白.结果发现,重组融合蛋白在原核细胞中表达存在可溶和不可溶(包涵体)两种形式,表达量随IPTG诱导时间延长而增加,9 h达高峰(占菌体不溶性蛋白总量的57.4%),经Ni-NTA亲合层析纯化得到重组融合蛋白,为进一步分离目的蛋白单体并研制和开发这一产品提供了可靠依据.
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| 关 键 词： | 金属硫蛋白-Ⅰ 克隆 原核融合表达载体 重组融合蛋白 亲合层析 |
| 修稿时间： | 2002-02-08 |
Cloning, Expression and Purification of Rabbit Metallothionein-Ⅰ Gene in Escherichia Coli |
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