融合基因CPA-LTB在大肠埃希菌中表达条件的优化北大核心CSCD

目的在构建含有CPA-LTB融合基因的重组菌株基础上,对其表达条件进行优化,以获得高效表达的CPALTB融合蛋白。方法采用限制性内切酶酶切鉴定含CPA-LTB融合基因的重组质粒pCPA-LTB,然后采用均匀设计法对影响目的蛋白表达的因素和水平进行优化:设计实验方案,分别以不同浓度的IPTG和乳糖为诱导剂诱导融合蛋白的表达,SDS-PAGE检测不同条件下融合蛋白的表达情况。结果双酶切鉴定重组质粒含有CPA-LTB融合基因(1700bp),且阅读框架正确。以IPTG为诱导剂在pH 7.5、诱导温度31℃、转化菌菌液A600值为1.2、IPTG终浓度0.4mmol/L诱导6h,目的蛋白表达量最大,占菌体总蛋白相对含量的54%;以乳糖为诱导剂在pH 6.5、温度34℃、转化菌菌液A600值为0.6、乳糖终浓度0.1mmol/L诱导6h,融合蛋白的表达量最大,占菌体总蛋白相对含量的61%。优化前后两种诱导剂诱导表达的蛋白量分别增加63%和42%。结论 CPA-LTB融合基因表达质粒转化大肠埃希菌在优化的表达条件下高效表达目的蛋白,为研制α毒素基因工程亚单位疫苗奠定了基础。