刚地弓形虫RH株ROP11基因的克隆与真核表达载体的构建北大核心CSCD |
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引用本文: | 张晓磊张进顺朱晓波王春苗贾晓晖贾天军徐云鹏高雪.刚地弓形虫RH株ROP11基因的克隆与真核表达载体的构建北大核心CSCD[J].中国病原生物学杂志,2013(11):1002-1004. |
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作者姓名: | 张晓磊张进顺朱晓波王春苗贾晓晖贾天军徐云鹏高雪 |
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作者单位: | 1.河北北方学院病原生物与免疫学研究所075000; |
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基金项目: | 河北省高等学校科学技术研究重点项目(No.ZH2012010) |
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摘 要: | 目的构建刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白11(ROP11)的真核表达重组质粒并在真核细胞中表达目的蛋白。方法设计合成弓形虫ROP11基因引物,运用RT-PCR方法扩增ROP11基因并克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1-ROP11。将重组质粒转染HeLa细胞,采用间接免疫荧光法检测目的蛋白表达。结果 RT-PCR扩增弓形虫ROP11基因片段为1 548bp,与预期大小相符。构建的重组质粒pcDNA3.1-ROP11经PCR及EcoRⅠ和NotⅠ双酶切鉴定正确。重组质粒测序后与GenBank报道的ROP11基因比对,核苷酸序列同源性和推导氨基酸序列同源性均为99%。免疫荧光检测显示,在重组质粒转染的HeLa细胞胞浆观察到黄绿色荧光,对照组无荧光。结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-ROP11,该重组质粒能够在真核细胞中表达目的蛋白,为弓形虫核酸疫苗的研制奠定了基础。
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关 键 词: | 刚地弓形虫 ROP11 真核表达质粒 |
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