| 保守性多巴胺能神经营养因子重组杆状病毒转移载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 张俊,牛朝诗,高歌,梅加明,汤深凤.保守性多巴胺能神经营养因子重组杆状病毒转移载体的构建及鉴定[J].中华神经医学杂志,2010,9(8). |
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| 作者姓名： | 张俊 牛朝诗 高歌 梅加明 汤深凤 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学附属省立医院神经外科,安徽省立医院神经分子生物学与神经再生修复研究室,合肥,230001 |
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| 摘 要： | 目的 构建并鉴定小鼠保守性多巴胺能神经营养因子(mCDNF)重组杆状病毒转移载体pFastBacHTb-mCDNF. 方法 应用Trizol法提取小鼠组织总RNA,反转成cDNA,经PCR扩增得到带有预定酶切位点(BamH Ⅰ、Xho Ⅰ)的mCDNF基因全长(564 bp),回收片段并克隆至pGEM-T载体,测序验证PCR结果的准确性.将mCDNF定向克隆到pFastBacHTb载体,构建含有mCDNF基因的重组质粒pFastBacHTb-mCDNF,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,摇菌抽取质粒进行测序和双酶切鉴定. 结果 RT-PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳显示得到预定大小的目的 条带(564 bp),mCDNF的T-A克隆经蓝白斑抗性筛选获得阳性克隆,PCR及测序均提示pGEM-T-CDNF载体成功构建.重组质粒pGEM-T-mCDNF和pFastBacHTb载体进行BamH Ⅰ、Xho Ⅰ限制性内切酶酶切后再连接,得到pFastBacHTb-mCDNF重组质粒,并经PCR、酶切及测序验证无误. 结论 本实验成功构建了mCDNF重组杆状病毒转移载体pFastBacHTb-mCDNF,为该营养因子的进一步研究奠定了一定基础.
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| 关 键 词： | 保守性多巴胺能神经营养因子 重组杆状病毒转移载体 帕金森病 |
Construction and identification of a recombinant baculovirus transfer vector of conserved dopamine neurotrophic factor |
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| ZHANG Jun,NIU Chao-shi,GAO Ge,MEI Jia-ming,Tang Shen-feng.Construction and identification of a recombinant baculovirus transfer vector of conserved dopamine neurotrophic factor[J].Chinese Journal of Neuromedicine,2010,9(8). |
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| Authors: | ZHANG Jun NIU Chao-shi GAO Ge MEI Jia-ming Tang Shen-feng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Conserved dopamine neurotrophic factor Baculovirus transfer vector Parkinson's disease |
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