| bFGF人源性抗体Fab段基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 邓宁,关文达,王宏,黄建华,唐勇,杨红宇,向军俭.bFGF人源性抗体Fab段基因克隆及其在大肠杆菌中的表达[J].免疫学杂志,2007,23(6):598-601,605. |
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| 作者姓名： | 邓宁 关文达 王宏 黄建华 唐勇 杨红宇 向军俭 |
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| 作者单位： | 1. 暨南大学分子免疫学与抗体工程研究中心,广州,510632
2. 中山大学第三附属医院检验科,广州,510630 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金
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广东省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的 用自身免疫病患者外周血淋巴细胞获得的bFGF人源性抗体Fab基因,构建编码人源性bFGF抗体Fab表达载体在大肠杆菌中表达,检测其结合抗原的活性.方法 从筛选获得的噬菌体抗体质粒pComb3-Fab中,PCR再扩增出Fd段和κ链基因,克隆到pMD18-T载体中并测序,在NCBI/GenBank的Ig BLAST数据库进行BLAST序列分析.鉴定Fd段和κ链基因后,插入到表达载体pComb3H,切除gene Ⅲ,构建bFGF抗体Fab可溶性表达载体,并在XL1-Blue菌中表达.用SDS-PAGE、Western blot和ELISA方法 鉴定表达产物.结果 Ig BLAST数据库进行BLAST序列分析结果 显示,Fd-6、Fd-25、Fd-26的FWR区与数据库中人源抗体序列FWR区的同源性为95%、97.4%、94.3%,3个CDR区均为特异性序列,证实为人源性抗体Fd段和κ链基因.SDS-PAGE和Western blot检测到目标蛋白带.ELISA结果 显示,表达产物Fab具有与重组人bFGF特异性结合活性,与Human TNF-α、Human IL-2均无交叉反应.结论 插入到表达载体pComb3H的来源于人源性噬菌体抗体库的Fab基因证明为人源性抗体基因,该基因可在XLl-Blue菌株中可溶性表达,且具有特异结合抗原的活性.
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| 关 键 词： | bFGF Fab 原核表达 bFGF 人源性抗体 基因克隆 大肠杆菌 可溶性表达 human expression Cloning 菌株 抗体基因 噬菌体抗体库 来源 交叉反应 Human 结合活性 重组人 白带 目标 抗体序列 同源性 |
| 文章编号： | 1000-8861（2007）06-0598-05 |
| 修稿时间： | 2007-05-142007-08-30 |
Cloning and expression of human anti-bFGF Fab in E. coli |
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| DENG Ning,GUAN Wen-da,WANG Hong,TANG Yong,TANG Yong,YANG Hong-yu,XIANG Jun-jian.Cloning and expression of human anti-bFGF Fab in E. coli[J].Immunological Journal,2007,23(6):598-601,605. |
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| Authors: | DENG Ning GUAN Wen-da WANG Hong TANG Yong TANG Yong YANG Hong-yu XIANG Jun-jian |
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| Institution: | Molecular Immunology and Antibody Engineering Center, Jinan University, Guangzhou 510632, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | bFGF Fab Prokaryotic expression |
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