| 人可溶性APRIL突变体的原核表达与纯化 |
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| 引用本文： | 郑英如,李力,李媛,张立,龚薇,刘宝英. 人可溶性APRIL突变体的原核表达与纯化[J]. 免疫学杂志, 2007, 23(6): 636-639,644 |
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| 作者姓名： | 郑英如 李力 李媛 张立 龚薇 刘宝英 |
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| 作者单位： | 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科,重庆,400042;第三军医大学生物化学与分子生物学教研室,重庆,400038 |
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| 基金项目： | 重庆市科委科学基金计划 , 第三军医大学校科研和教改项目 |
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| 摘 要： | 目的 制备人可溶性增殖诱导配体(soluble a proliferation inducing ligand,sAPRIL)的两种突变体,为寻找APRIL 的竞争抑制剂创造条件.方法 采用一步反向PCR法,以人APRIL第186位甘氨酸(186G)和187位谷氨酰胺(187Q)残基为突变位点,构建如下两个突变体DNA,即sAPRIL突变体-1(mutant sAPRIL-1,msAPRIL-1)DNA(186G被赖氨酸残基K置换,187Q缺失)和msAPRIL-2 DNA(186G187Q置换为186K187G);测序后将两突变体DNA分别亚克隆于原核表达载体pQE-80L,继而在大肠杆菌DH5α中表达相应突变体蛋白,经SDS-PAGE和Westernblot鉴定表达产物,经Ni2 -NTA和Sephadex G-75柱层析纯化相应突变体蛋白.结果 一步反向PCR结合DNA测序,得到了与上述设计一致的两个sAPRIL突变体DNA.将两突变体DNA分别亚克隆于pQE-80L后,在大肠杆菌DH5α中成功表达了相应突变体蛋白.经Ni2 -NTA柱层析成功地纯化了两突变体蛋白,经Sephadex G-75柱层析成功获得了两突变体蛋白的三聚体分子.结论 成功制备了sAPRIL的两种突变体蛋白,为寻找基于sAPRIL突变体的抗肿瘤分子奠定了基础.
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| 关 键 词： | 增殖诱导配体 突变体 原核表达 肿瘤 |
| 文章编号： | 1000-8861（2007）06-0636-05 |
| 修稿时间： | 2007-07-092007-09-05 |
Prokaryotic expression and purification of human soluble APRIL mutants |
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| ZHENG Ying-ru,LI Li,LI Yuan,ZHANG Li,GONG Wei,LIU Bao-ying. Prokaryotic expression and purification of human soluble APRIL mutants[J]. Immunological Journal, 2007, 23(6): 636-639,644 |
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| Authors: | ZHENG Ying-ru LI Li LI Yuan ZHANG Li GONG Wei LIU Bao-ying |
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| Affiliation: | Department of Obstetrics and Gynecology, Institute of Surgery Research, Daping Hospital, Third Militarg Medical University, Chongqing 400042, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | A proliferation inducing ligand Mutant Prokaryotic expression Tumor |
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