不同的固定及渗透方法对小鼠卵母细胞免疫荧光染色的影响 |
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作者姓名: | 谢颖颖 邵华 郑俊克 马恒东 李瑞珍 |
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作者单位: | 四川农业大学动物科技学院畜禽品种资源发掘与利用省重点实验室 雅安625014(谢颖颖,马恒东),上海交通大学医学院新华医院泌尿外科组织工程研究室 上海200092(邵华),上海交通大学医学院新华医院发育生物学研究中心 上海200092(郑俊克,李瑞珍) |
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基金项目: | 国家重点基础研究发展规划项目(“九七三”计划)(001CB509903,001CB509904)~~ |
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摘 要: | 目的探索有效的染色前固定及渗透卵母细胞的方法,以提高小鼠卵母细胞免疫荧光染色的效率。方法采用4种不同的固定及渗透方法处理小鼠卵母细胞:①方案A:先用4%多聚甲醛(PFA)固定1 h,再用0.5%Triton X-100穿透10 min;②方案B:先用0.5%Triton X-100穿透10 min,再用4%PFA固定1 h;③方案C:用1%PFA 0.5%Triton X-100同时固定与穿透1 h;④方案D:用-20℃预冷甲醇固定15 min。分析10种核蛋白(TFⅡA、TFⅡB、TAF1、TAF4、polⅡ、BRF1、MeCP2、MBD2ab、HP1α及HP1β)在小鼠卵母细胞中的免疫荧光染色效果。结果只有方案C能够完全检测出这10种蛋白质。结论用1%PFA 0.5%Triton X-100同时固定与穿透1 h,可以在小鼠卵母细胞形态保持良好的同时检测出更多的蛋白质。
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关 键 词: | 固定 渗透 卵母细胞 免疫荧光染色 激光扫描共聚焦显微镜 小鼠 |
文章编号: | 0258-5898(2008)03-0349-04 |
修稿时间: | 2007-11-23 |
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