| 细菌内同源重组构建携带人DMT1基因的重组腺病毒 |
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| 引用本文： | 徐华敏,姜宏,谢俊霞. 细菌内同源重组构建携带人DMT1基因的重组腺病毒[J]. 青岛大学医学院学报, 2008, 44(3): 189-191 |
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| 作者姓名： | 徐华敏 姜宏 谢俊霞 |
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| 作者单位： | 青岛大学国家生理学重点(培育)学科,山东,青岛,266071;青岛大学国家生理学重点(培育)学科,山东,青岛,266071;青岛大学国家生理学重点(培育)学科,山东,青岛,266071 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 , 山东省青岛市科技局资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 利用细菌内同源重组法构建携带二价金属离子转运蛋白1(DMT1)编码基因的重组腺病毒.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从人胚近段小肠中获取人的全长DMT1-IRE的cDNA,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形成转移质粒pAdTrack-CMV-DMT1-IRE,在感受态大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy1同源重组,利用卡那霉素抗性平板初步筛选重组质粒阳性克隆,经PacⅠ酶切鉴定和PCR鉴定获得到重组腺病毒载体pAdEasy1-DMT1-IRE.线性化的重组质粒转染HEK293细胞,获得高滴度的重组腺病毒.结果 RT-PCR反应扩增出1 841 bp的片段,重组质粒阳性克隆pAdEasy1-DMT1-IRE经PacⅠ酶切后获得一大于20 kb的大片段和4.5 kb的特征性片段,PCR鉴定扩增出DMT1的片段,证明重组腺病毒质粒中已成功插入目的 基因DMT1-IRE.转染293细胞后细胞表达GFP荧光,显示293细胞稳定表达外源性的DMT1-IRE基因.结论 携带DMT1-IRE基因的重组腺病毒质粒构建成功,获得高滴度的重组腺病毒,为DMT1基因进一步功能的研究提供基础.
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| 关 键 词： | 阳离子转运蛋白质类 重组 遗传 腺病毒科 |
| 文章编号： | 1672-4488(2008)03-0189-03 |
| 修稿时间： | 2007-12-12 |
THE CONSTRUCTION OF RECOMBINANT ADENOVIRUS CONTAINING GENE OF HUMAN DMT1 BY HOMOLOGOUS RECOMBINATION IN BACTERIA |
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| XU HUA-MIN,JIANG HONG,XIE JUN-XIA. THE CONSTRUCTION OF RECOMBINANT ADENOVIRUS CONTAINING GENE OF HUMAN DMT1 BY HOMOLOGOUS RECOMBINATION IN BACTERIA[J]. Acta Academiae Medicinae Qingdao Universitatis, 2008, 44(3): 189-191 |
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| Authors: | XU HUA-MIN JIANG HONG XIE JUN-XIA |
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| Affiliation: | XU HUA-MIN,JIANG HONG,XIE JUN-XIA(State Key Disciplines: Physiology(in incubation),Qingdao University,Qingdao 266071,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | DMT1 Homologous recombination Recombinant adenovirus |
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