| 可调控CYP 4A1的逆转录病毒重组质粒的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 秦欢,汪炳华,周赤燕,黄丽丽. 可调控CYP 4A1的逆转录病毒重组质粒的构建与鉴定[J]. 武汉大学学报(医学版), 2009, 30(1): 1-5,37 |
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| 作者姓名： | 秦欢 汪炳华 周赤燕 黄丽丽 |
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| 作者单位： | 武汉大学医学院生物化学与分子生物学系,湖北,武汉,430071;武汉市妇女儿童医疗保健中心检验科,湖北,武汉,430016;武汉大学医学院生物化学与分子生物学系,湖北,武汉,430071 |
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| 摘 要： | 目的:运用分子生物学技术克隆CYP 4A1全长cDNA基因,进一步构建可由强力霉素诱导表达CYP4A1的逆转录病毒重组质粒。方法:运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从大鼠肝组织中扩增出CYP 4A1全长基因,克隆至pMD18-T载体,将构建正确的pMD18-CYP 4A1质粒采用双酶切亚克隆到逆转录病毒载体载体pRe-vTRE中,采用酶切反应、PCR鉴定和序列测定鉴定重组逆转录病毒载体pRevTRE/CYP 4A1;在脂质体介导下分别将质粒pRevTRE/CYP 4A1与逆转录病毒四环素调节质粒pRevTet-on转染至包装细胞PT67,分别经抗性筛选获得稳定产生病毒的包装细胞系后收集转染后的细胞上清。用荧光定量PCR测定病毒滴度。结果:经酶切鉴定、PCR鉴定和序列测定证实成功构建了pRevTRE/CYP 4A1逆转录病毒重组质粒;转染pRevTet-on的PT67细胞病毒滴度为7.2×1010copies/L,转染pRevTRE/CYP 4A1的PT67细胞病毒滴度为5.46×109copies/L。结论:成功构建了含四环素调控CYP 4A1基因的逆转录病毒重组质粒,建立了能产较高滴度逆转录病毒的包装细胞系,为CYP 4A1基因功能及其相关疾病的研究打下实验基础。
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| 关 键 词： | 细胞色素P450 CYP 4A1 TA克隆 荧光定量检测 Tet-on诱导表达系统 |
Construction and Identification of a Recombinant Retroviral Vector of Full CYP 4A1 Gene Regulated by Tetracycline |
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| QIN Huan,WANG Binghua,ZHOU Chiyan,HUANG Lili. Construction and Identification of a Recombinant Retroviral Vector of Full CYP 4A1 Gene Regulated by Tetracycline[J]. Medical Journal of Wuhan University, 2009, 30(1): 1-5,37 |
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| Authors: | QIN Huan WANG Binghua ZHOU Chiyan HUANG Lili |
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| Affiliation: | QIN Huan1,2,WANG Binghua1,ZHOU Chiyan1,HUANG Lili11Dept.of Biochemistry and Molecular Biology,School of Medicine,Wuhan University,Wuhan 430071,China2Dept.of Laboratory,The Women and Children's Hospital of Wuhan,Wuhan 430016,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cytochrome P450 CYP 4A1 TA Clone Fluorescent Quantitative PCR Tet-On System |
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