活细胞硫化氢检测新方法

目的：建立测定活细胞释放微量硫化氢（hydrogen sulfide，H₂S）的简易方法。方法：在细胞培养板盖上方黏附滤膜，细胞释放的硫化氢与滤膜上的醋酸锌反应产生硫化锌，采用亚甲基蓝分光光度法测定并计算细胞释放的硫化氢的量。应用该方法分别检测了HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞硫化氢的释放量。结果：HepG2细胞添加L-半胱氨酸以及辅酶磷酸吡哆醛后，继续培养12 h，H₂S释放量为(859.39±19.12) nmol/(min·106 cells)；给予胱硫醚-γ-裂解酶抑制剂炔丙基甘氨酸（DL-propargylglycine, PAG）后，H₂S产率下降到(341.34±105.90) nmol/(min·10⁶ cells)；胱硫醚-β-合酶抑制剂间羟胺处理后，H₂S产率下降到(375.05±174.50) nmol/(min·10⁶ cells)；两种酶抑制剂联合使用后H₂S释放量显著抑制，为(204.47±97.14) nmol/(min·10⁶ cells)。人脐静脉内皮细胞也可内源性产生H₂S，HUVEC细胞H₂S的释放量为(26.23±3.24) nmol/(min·10⁶ cells)，约为HepG2细胞产量的1/30。台盼蓝检测细胞活性大于95%，细胞生长状态良好，表明该方法无细胞毒作用，细胞可根据实验需要继续培养。结论：滤膜吸附法简便易行、实用可靠，可应用于活细胞释放硫化氢的测定。