| 靶向survivin的siRNA表达载体的构建及生物活性鉴定 |
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| 引用本文： | 王小林,候建全,何军,杨慎敏,温端改.靶向survivin的siRNA表达载体的构建及生物活性鉴定[J].临床检验杂志,2007,25(1):28-31. |
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| 作者姓名： | 王小林 候建全 何军 杨慎敏 温端改 |
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| 作者单位： | 苏州大学附属第一医院泌尿外科,江苏苏州,215006;苏州大学附属第一医院泌尿外科,江苏苏州,215006;苏州大学附属第一医院泌尿外科,江苏苏州,215006;苏州大学附属第一医院泌尿外科,江苏苏州,215006;苏州大学附属第一医院泌尿外科,江苏苏州,215006 |
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| 基金项目： | 江苏省重点人才基金资助项目（RC2003094）;江苏省卫生厅科技基金资助项目（H200517）;江苏省教育厅科技基金资助项目（Q1122031）;江苏省社会发展基金资助项目（BS2005619）. |
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| 摘 要： | 目的 构建靶向survivin的siRNA表达载体。方法 设计合成靶向Survivin的siRNA相应DNA模板单链，将其克隆入空质粒pRNAT-U6．1／Neo，模板链两端分别设计两个不同的酶切位点，退火形成siRNA载体插入片段。用限制性酶切将空载体线性化，T4DNA连接酶将siRNA片段插入空载体中，对该重组表达载体进行鉴定，获得RNA干扰质粒载体pRNAT-U6．1／Neo-sur-vivin。脂质体法将pRNAT-U6．1／Neo-survivin导入膀胱癌T24细胞株，实时定量PCR法检测对T24细胞survivin基因表达的抑制情况。结果 PCR、酶切鉴定、DNA测序证实表达质粒构建成功，无碱基突变。重组载体能干扰T24细胞survivin基因的表达，并具有新霉素抗性。能够用G-418筛选稳定转化的细胞株。结论 成功构建了靶向survivin基因表达的RNA干扰质粒载体pR-NAT-U6．1／Neo-survivin。并转染膀胱癌细胞株，为进一步运用RNA干扰技术进行survivin基因功能研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | survivin基因 小干扰RNA 遗传载体 |
| 文章编号： | 1001-764X(2007)01-0028-04 |
| 修稿时间： | 2006-05-12 |
Construction and identification of survivin-targeting siRNA-expressing plasmid |
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| WANG Xiaolin,HOU Jianquan,HE Jun,YANG Shenmin,WEN Duangai.Construction and identification of survivin-targeting siRNA-expressing plasmid[J].Chinese Journal of Clinical Laboratory Science,2007,25(1):28-31. |
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| Authors: | WANG Xiaolin HOU Jianquan HE Jun YANG Shenmin WEN Duangai |
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| Institution: | Department of Urology,The First Affiliated Hospital of Soochow University, Suzhou 215006, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | survivin siRNA genetic vectors |
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