无血清神经培养基体外培养大鼠骨髓源性神经干细胞

背景：传统的胚胎来源和脑来源的神经干细胞由于取材困难，并受伦理道德的约束，应用受到极大限制。 目的：拟利用无血清神经培养基体外培养大鼠骨髓源性神经干细胞。 方法：抽取大鼠股骨和胫骨的骨髓，采用全骨髓培养及贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞，流式细胞仪检测细胞周期及细胞免疫表型，油红O染色及茜素红染色鉴定其成骨、成脂能力。取传至4~6代的大鼠骨髓间充质干细胞，加入含表皮生长因子、碱性成纤维生长因子、B27的DMEM/F12无血清神经培养基进行诱导，采用免疫荧光染色及流式细胞仪予以鉴定。 结果与结论：P5骨髓间充质干细胞(91.5±3.1)%处于G1期，高表达CD90及CD29，不表达CD45及CD34，成脂诱导后在胞质中可见桔红色脂滴，成骨诱导后可见黑色矿化结节。骨髓源性神经干细胞巢蛋白免疫荧光染色呈阳性，流式细胞仪检测其阳性率为(97.2±1.1)%，NSE，β-Tubulin，GFAP及MAP-2抗原免疫荧光染色均呈阳性表达。表明在无血清神经培养基中加入特定生长因子，骨髓间充质干细胞可诱导为神经干细胞；在体外适当条件下，骨髓源性神经干细胞具有增殖和分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的能力。

Culture of bone marrow-derived neural stem cells using serum-free neural induction medium