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| 结核分支杆菌Ag85B融合蛋白表达载体的构建及纯化 | |
| 引用本文： | 游力,赵跃然,许晓群,冯进波.结核分支杆菌Ag85B融合蛋白表达载体的构建及纯化[J].山东大学学报(医学版),2005,43(7):570-573. |
| 作者姓名： | 游力 赵跃然 许晓群 冯进波 |
| 作者单位： | 1. 山东省医学科学院基础医学研究所,山东,济南,250062 2. 山东省立医院中心实验室,山东,济南,250021 3. 山东大学齐鲁医院心内科实验室,山东,济南,250012 |
| 基金项目： | 山东省自然科学基金资助课题（Y98C05034）. |
| 摘 要： | 目的：构建结核分支杆菌Ag85B基因在大肠杆菌的融合表达载体，制备MBP／Ag85B融合蛋白并将其纯化。方法：常规方法构建重组表达质粒pMAL-p2-Ag85B，内切酶EcoRⅠ/HindⅢ酶切鉴定；重组表达质粒pMAL-p2-Ag85B转化大肠杆菌，经0．3mmol／L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D thiogalactoside，IPTG）诱导表达产生融合蛋白（MBP／Ag85B），Western blot鉴定表达产物。pMAL纯化树脂（Amylose resin）对MBP／Ag85B融合蛋白纯化。结果：重组质粒pMAL-p2-Ag85B经EcoRⅠ／HindⅢ酶切后，1％琼脂糖凝胶电泳证实Ag85B正向插入pMAL-p2载体，重组菌经IPTG诱导后，有约70kD蛋白表达，与预期的融合蛋白分子量相符，蛋白表达量约占细菌总蛋白量的40％；Western blot显示，MBP／Ag85B融合蛋白与人抗结核IgG抗体呈特异性反应；经Amylose resin纯化后，MBP／Ag85B融合蛋白的纯度可达95％以上。结论：成功构建结核分支杆菌Ag85B重组融合蛋白表达质粒并制备及纯化其融合蛋白，为进一步研究Ag85B生物学功能及其抗原表位分析奠定了物质基础。 |
| 关 键 词： | 分支杆菌，结核 基因，Ag85B 重组融合蛋白质类 |
| 文章编号： | 1671-7554（2005）07-0570-04 |
| 收稿时间： | 2003-12-15 |
| 修稿时间： | 2003年12月15 |
Construction and purification of antigen 85B fusion protein expression vector of mycobacterium tuberculosis |
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| YOU Li,ZHAO Yue-ran,XU Xiao-qun,FENG JIN-bo.Construction and purification of antigen 85B fusion protein expression vector of mycobacterium tuberculosis[J].Journal of Shandong University:Health Sciences,2005,43(7):570-573. | |
| Authors: | YOU Li ZHAO Yue-ran XU Xiao-qun FENG JIN-bo |
| Abstract: | |
| Keywords: | Mycobacterium tuberculosis Genes Ag85B Recombinant fusion proteins |
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