| 表面展示有前列腺酸性磷酸酶多肽(PAP_(114-128))的PP7噬菌体样颗粒的制备及其活性验证北大核心CSCD |
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| 引用本文： | 孙艳丽,孙艳花.表面展示有前列腺酸性磷酸酶多肽(PAP_(114-128))的PP7噬菌体样颗粒的制备及其活性验证北大核心CSCD[J].细胞与分子免疫学杂志,2016(10):1356-1361. |
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| 作者姓名： | 孙艳丽 孙艳花 |
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| 作者单位： | 1.潍坊医学院医学检验学系261053;2.潍坊市人民医院血液内科261000; |
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| 基金项目： | 山东省自然科学基金(ZR2015HL036)；山东省高等学校科技计划(J14LK14)；潍坊医学院2013年科技创新重点基金(K1301004) |
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| 摘 要： | 目的获得表面展示有前列腺酸性磷酸酶多肽片段(PAP_(114-128))的PP7噬菌体样颗粒,并证实其保留原有的生物活性。方法用基因突变和重叠PCR技术扩增出PP7衣壳蛋白单链二聚体(简称为2PP7)基因,将其插入到载体p ETDuet-1中,获得质粒p ETDuet-2PP7,然后通过普通PCR获得携带有PAP_(114-128)编码基因的PP7衣壳蛋白基因,将其插入到质粒p ETDuet-2PP7中,获得质粒p ETDuet-2PP7-PAP_(114-128);将上述重组质粒转化大肠杆菌,诱导表达产物用SDS-PAGE、双向免疫扩散以及ELISA进行鉴定。结果以ExTaq DNA聚合酶行重叠PCR可获得2PP7基因,其表达产物衣壳蛋白单链二聚体与野生型PP7噬菌体衣壳蛋白的抗原性相同;展示于PP7噬菌体样颗粒表面的PAP_(114-128)表位与天然的人PAP蛋白相应表位无异,且能诱导较高水平的抗体产生。结论含重复序列的2PP7基因可通过将基因突变和重叠PCR技术联用获得,且以其为基础成功制备表面展示有PAP114-128的PP7噬菌体样颗粒,不仅可解决多肽不稳定的问题,也为研究多肽的递送及功能奠定基础。
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| 关 键 词： | PP7噬菌体 前列腺酸性磷酸酶 衣壳蛋白单链二聚体 多肽 |
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