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PTEN基因重组腺病毒载体的构建及鉴定
引用本文:徐中华,钱海鑫,钱永跃.PTEN基因重组腺病毒载体的构建及鉴定[J].苏州大学学报(自然科学版),2011,31(1):87-89.
作者姓名:徐中华  钱海鑫  钱永跃
作者单位:徐中华 (苏州大学附属第二医院,胸心外科,江苏苏州,215004) ; 钱海鑫 (苏州大学附属第一医院,普外科,江苏苏州,215006) ; 钱永跃 (苏州大学附属第二医院,胸心外科,江苏苏州,215004) ;
摘    要:目的构建含PTEN基因的重组腺病毒载体,为PTEN进行肺腺癌的基因治疗奠定基础。方法用PTEN引物VT415和VT416扩增PTEN基因后,分别用EcoRⅠ+SalⅠ双酶切PCR-PTEN和PSUCMV,回收并纯化PTEN cDNA小片断和PSUCMV的大片断,使两者连接获得含有PTEN基因的重组穿梭质粒载体PSUCMV-PTEN;采用细胞内同源重组方法构建PTEN基因重组腺病毒载体,将质粒PSUCMV-PTEN与含有5型腺病毒右臂的质粒Pbghe3通过Lipofectamine 2000共转染至293细胞,经PCR鉴定,扩增病毒,氯化铯密度梯度离心法纯化浓缩,测定病毒滴度。结果经双酶切和PCR进行鉴定,经鉴定正确的腺病毒命名为VSUCMV-PTEN,TCID_(50)法测定病毒滴度为1.0×10^10pfu/ml。结论成功构建了含PTEN基因的重组腺病毒载体Ad-PTEN,为下一步体内外实验证实PTEN对肺癌的抑制作用研究打下基础。

关 键 词:腺病毒载体  PTEN  构建  鉴定

Construction and Identification of Recombinant Adenovirus Vector of PTEN Gene
XU Zhong-hua,QIAN Hai-xin,QIAN Yong-yue.Construction and Identification of Recombinant Adenovirus Vector of PTEN Gene[J].Suzhou University Journal of Medical Science,2011,31(1):87-89.
Authors:XU Zhong-hua  QIAN Hai-xin  QIAN Yong-yue
Institution:1.Dept of Thoracic Surgery,the Second Hospital Affiliated to Soochow University,Jiangsu Suzhou 215004,China;2.Dept of General Surgery,the First Hospital Affiliated to Soochow University,Jiangsu Suzhou 215006,China)
Abstract:
Keywords:adenovirus vector  PTEN  construction  identification
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