介导人α-反义寡核苷酸慢病毒载体的构建 |
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引用本文: | 赖颖晖,赖永榕,杨高晖.介导人α-反义寡核苷酸慢病毒载体的构建[J].中国实验诊断学,2010,14(9):1358-1362. |
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作者姓名: | 赖颖晖 赖永榕 杨高晖 |
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作者单位: | 广西医科大学第一附属医院,血液科,广西,南宁,530021 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目,广西研究生教育创新计划资助项目 |
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摘 要: | 目的构建介导人α-反义寡核苷酸的慢病毒载体,为α-反义寡核苷酸对β-地中海贫血基因治疗的体内试验提供稳定的转染细胞载体。方法根据人α-反义寡核苷酸序列设计siRNA、合成DNA片段,通过双限制性内切酶消化和连接的方法构建pGCSIL-vshRNA-GFP载体质粒,接着该质粒转化感受态的大肠杆菌E.coliDH5α,通过PCR及基因测序鉴定阳性克隆,再经Lipofectamine 2000将pGCSIL-vshRNA-GFP,pHelper 1.0和pHelper 2.0三质粒系统共转染293 T细胞包装病毒,通过绿色荧光蛋白的表达测定收集的病毒滴度。结果重组质粒的外源基因PCR鉴定正确,基因测序结果与所需要的α-反义寡核苷酸序列完全一致,浓缩后病毒滴度为5×109TU/ml。结论成功构建介导人α-反义寡核苷酸的慢病毒载体。
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关 键 词: | 慢病毒载体 反义寡核苷酸 基因治疗 |
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