白藜芦醇通过激活PI3K/Akt通路抑制高糖致肾小管上皮细胞凋亡的研究

目的:白藜芦醇对高糖作用下肾小管上皮细胞(HK-2)氧化应激介导的凋亡影响及作用机制。方法:体外培养肾小管上皮细胞,高糖作用于肾小管上皮细胞诱导其凋亡,设置空白对照组、模型组(30 mmol·L~(-1)高糖处理)、不同浓度(5、10μmol·L~(-1))白藜芦醇组,LY294002(PI3K抑制剂)组(10μmol·L~(-1))。使用MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;JC-1检测线粒体膜电位(MMP);DHE荧光探针检测ROS的变化;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH-PX)含量;Western-blot法检测各组细胞色素C(CYT-C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平以及Akt的磷酸化情况。结果:与空白对照组相比高糖损伤组能够显著降低肾小管上皮细胞的活力,增加细胞中ROS的含量和凋亡率,LDH(细胞外)、MDA含量显著增加,SOD、GSH-PX活性显著下降,同时降低线粒体膜电位,增加了CYT-C、Caspase-3的表达,而p-Akt/Akt表达降低(P0.01)。不同浓度白藜芦醇(起效剂量5μmol·L~(-1),高剂量10μmol·L~(-1))和高糖同时作用肾小管上皮细胞时,细胞存活率逐渐上升,ROS含量及凋亡率逐渐下降,LDH、MDA含量逐渐下降,SOD、GSH-PX活性随之上升,线粒体膜电位提升,CYT-C、Caspase-3表达显著下降,p-Akt/Akt表达增加(P0.01)。LY294002(PI3K抑制剂)组上述指标的检测结果与白藜芦醇组相反。结论:白藜芦醇可能部分通过激活PI3K/Akt通路抑制氧化应激及其诱导的凋亡,从而对肾小管上皮细胞发挥保护作用。

Resveratrol Inhibits Oxidative Stress-mediated Apoptosis in Renal Tubular Epithelial Cells by Activating PI3K/Akt Pathway