4种肺脏全器官脱细胞支架制备方法的比较

目的分别采用4种不同的方法灌注大鼠肺脏,采集灌注后肺组织大体形态;采取5种不同的染色方法比较脱细胞后肺组织的变化,筛选出较优的脱细胞方法。方法选择SD大鼠12只,雌雄不限,鼠龄8～9周,体质量200～300 g。随机分成4组3-(3-胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(CHAPS)组、乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-2Na)组、十二烷基硫酸钠(SDS)组、冻/融组],每组3只。取出整个大鼠肺,用设定的灌注系统采用0.9%氯化钠溶液(生理盐水)适当冲洗其上血液。采用下述脱细胞方法制备:CHAPS组用浓度8 mmol/L CHAPS灌注,EDTA-2Na组用浓度25 mmol/L EDTA-2Na灌注,SDS组用0.1%SDS灌注,冻/融组先冻融后再用0.1%SDS灌注,灌注完毕后均采用0.9%氯化钠溶液200 m L灌注冲洗,最后对脱细胞肺基质分别进行大体形态拍照、苏木精-伊红(HE)染色、弹性纤维(EVG)染色、masson染色、COL-Ⅰ免疫组织化学染色、COL-Ⅲ免疫组织化学染色。结果 CHAPS组肺组织大体形态最为透明;HE染色可见EDTA-2Na组仍残留较多细胞核成分,其余组未见明显的细胞核成分;各组脱细胞后,肺基质构成的肺泡、细支气管等支架结构基本完整。EVG染色可见SDS组和CHAPS组染色较淡,但是SDS组对微结构破坏较大,CHAPS组肺基质保留较完整;COL-Ⅰ免疫组织化学染色可见CHAPS组肺基质保留较其他组完好;COL-Ⅲ免疫组织化学染色可见:SDS组和冻/融组较CHAPS组染色较深,COL-Ⅲ保留较多,且SDS组同冻/融组深浅无明显差别。masson染色可见:CHAPS组和冻/融组肺胶原纤维保留较完整,SDS组肺胶原纤维破坏较大。结论浓度8 mmol/L CHAPS灌注方法是一种较好的制备肺脏脱细胞支架的方法。