| 原癌基因Pokemon的克隆原核表达及纯化 |
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| 引用本文： | 郎旭宇,闫萍,王惠珍,张悦红,程牛亮,郭睿.原癌基因Pokemon的克隆原核表达及纯化[J].中国药物与临床,2006,6(8):576-579. |
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| 作者姓名： | 郎旭宇 闫萍 王惠珍 张悦红 程牛亮 郭睿 |
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| 作者单位： | 1. 030006,太原,山西煤炭中心医院胸外科
2. 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室 |
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| 摘 要： | 目的克隆小鼠Pokemon(POKeryhroidmyeloidontogenicfactor)基因并进行原核表达及重组蛋白的纯化。方法应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增目的基因片段,克隆人pGEM-T-easy载体,经鉴定后,以限制性核酸内切酶分别消化重组质粒及原核表达载体pET-30a(+),体外定向连接,进行PCR、内切酶酶切及DNA序列分析,阳性重组表达质粒进一步转化到大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中诱导表达,经Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白,Westernblotting检测其特异性。结果限制性核酸酶切及序列分析表明重组表达质粒包含Pokemon基因编码区,阅读框架无移位;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示有预期相对分子质量为36000的重组蛋白表达,经亲和层析纯化后,融合蛋白的纯度达到90%以上;Westernblotting印迹表明纯化的融合蛋白具有特异的免疫反应特性。结论采用基因克隆技术成功构建了Pokemon原核表达载体,并获得了高纯度的重组蛋白,为后期抗体的制备及进一步研究该基因与肿瘤发生的关系奠定了基础。
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| 关 键 词： | 原癌基因 遗传载体 原核表达 |
| 收稿时间： | 04 25 2006 12:00AM |
| 修稿时间： | 2006年4月25日 |
Cloning,prokaryotic expression and purification of proto-oncogene Pokemon |
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| LANG Xu-yu,YAN Ping,WANG Hui-zhen,ZHANG Yue-hong,CHENG Niu-liang,GUO Rui.Cloning,prokaryotic expression and purification of proto-oncogene Pokemon[J].Chinese Remedies & Clinics,2006,6(8):576-579. |
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| Authors: | LANG Xu-yu YAN Ping WANG Hui-zhen ZHANG Yue-hong CHENG Niu-liang GUO Rui |
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| Institution: | Central Hospital of Shanxi Coal Bureau,Taiyuan 030006, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Proto-oncogenes Genetic vector Prokaryotic expression |
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