| hPARP-1高表达HaCaT细胞株的建立 |
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| 引用本文： | 龚春梅,庄志雄,陶功华,杨淋清,吴德生,刘建军.hPARP-1高表达HaCaT细胞株的建立[J].环境与健康杂志,2010,27(5). |
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| 作者姓名： | 龚春梅 庄志雄 陶功华 杨淋清 吴德生 刘建军 |
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| 作者单位： | 1. 深圳市疾病预防控制中心毒理研究室,广东,深圳,518020;中山大学公共卫生学院,广东,广州,510080
2. 深圳市疾病预防控制中心毒理研究室,广东,深圳,518020 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，深圳市科技计划重点资助项目 |
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| 摘 要： | 目的建立hPARP-1过表达的HaCaT细胞株,观察过表达该基因后所引起的生物学效应。方法常规提取人皮肤角质细胞HaCaT的总RNA,RT-PCR扩增PARP-1全长cDNA基因片段,构建含PARP-1全长cDNA基因片段的真核表达载体pEGFP-PARP-1,通过BglⅡ、xhoⅠ双酶切及测序鉴定其正确性。利用脂质体将pEGFP-N2和pEGFP-PARP-1分别转染人皮肤角质细胞HaCaT,通过G418加压筛选,建立稳定高表达hPARP-1的HaCaT-PARP-1细胞株,并采用Realtime Q-PCR和Western blotting检测其mRNA和蛋白的表达水平。结果 RT-PCR扩增产物经BglⅡ、xhoⅠ双酶切后,与pEGFP-N2连接构建的重组体经酶切和测序,结果与GeneBank报道序列一致。Realtime Q-PCR及Western blotting结果显示,转染pEGFP-PARP-1质粒的细胞其PARP-1在mRNA及蛋白的表达水平均显著高于对照组。结论 PARP-1高表达细胞株成功建立。
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| 关 键 词： | 基因 修复基因 转染 |
Construction of HaCaT Cell Strain with Over-Expression of hPARP-1 Gene |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | hPARp-1 |
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