脐血来源树突状细胞的体外扩增、鉴定及冻存 |
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引用本文: | 杨波,祁岩超,卢敏莹,潘东晓,申鸿卓.脐血来源树突状细胞的体外扩增、鉴定及冻存[J].中国医学文摘:肿瘤学,2008,22(1):84-86. |
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作者姓名: | 杨波 祁岩超 卢敏莹 潘东晓 申鸿卓 |
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作者单位: | 广州医学院附属肿瘤医院生物工程室,广州510095 |
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摘 要: | 目的研究脐血来源树突状细胞(DCs)的体外扩增、鉴定和冻存。方法用Ficoll分离获得脐血单个核细胞,以重组hGM—CSF、hIL-4及hTNF-α体外诱导培养14d。在DCs发育过程中,在光镜和电镜下观察其生长情况,应用流式细胞仪检测DCs表型。采用台盼蓝拒染法测定DCs增殖水平,MTT法检测DCs活化的T细胞对肿瘤细胞的杀伤性。同时用二甲亚砜作为保护剂,DCs经过-20℃和-80℃降温,在-196℃液氮保存,然后40℃水浴复苏。结果第6天体外培养的DCs由贴壁状态变为悬浮毛刺状细胞,随着培养时间的延长,此类细胞数量增多,第14天为形态不规则的毛刺状,为典型树突状细胞形态。流式细胞仪检测表明,成熟DCs高水平地表达HLA—DR、CD80、CD83、CD1a、CD11c。被激活的T细胞对2种来源于不同组织的肿瘤细胞均产生了明显的杀伤性。冻存DCs和新鲜DCs的生物活性无明显差异。结论脐血单个核细胞细胞经hGM—CSF+hIL-4+hTNF—α体外培养,能诱导出DCs,为进一步开展DCs的实验研究与临床应用奠定了基础。
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关 键 词: | 树突状细胞 脐血 体外扩增 冻存 |
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